アシドロコンポスト化機構の分子生物学的手法による解明

利用分子生物学方法阐明酸堆肥机制

• 批准号: 13875155
• 负责人: 西野 徳三
• 金额: $ 1.41万
• 依托单位: Tohoku University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-13875155/
• 关键词: コンポスト; アシドロコンポスト化; 微生物相; PCR-DGGE; FISH; 定量的PCR; アシドロコンポスト; DGGE; 有機性廃棄物

1)前年度に我々は,「アシドロコンポスト化」と命名した生ゴミの微生物分解システムにおける微生物相を,主にPCR-DGGE (polymerase chain reaction-denaturing gradient gel electrophoresis)法を用いて解析し,同システムにおいて乳酸菌に属する細菌が主要微生物として長期間安定に存在していることを明らかにした.しかし同法には,DNA抽出やPCR増幅といった過程においてバイアスが存在するため定量性に欠けるという問題がある.また,単にDNAを検出しているだけであるため,すでに死滅した菌であっても検出されている可能性がある.そこでFISH (fluorescence in situ hybridization)法および定量的PCR法を用いる事により,コンポスト内微生物相の観察を行った.その結果やはり微生物の半数以上が乳酸菌であり,なおかつ活発に生育している事,また,その絶対数の経時的変動が確認できた.2)生ゴミに含まれる過剰な油分はコンポスト化に悪影響を及ぼすことが一般に知られている.アシドロコンポスト化において油分の分解を促進させる微生物種もしくはそれらが生産する脂質分解酵素を獲得すべく,同コンポストからの菌体外リパーゼ生産菌をスクリーニングした.有望株が分泌する酵素の性質を調べた結果同酵素の生産するリパーゼは酸性領域にに至適pHを持つ,新奇性の高いものであることが明らかになった.

1) before the annual に I 々 は, "ア シ ド ロ コ ン ポ ス ト" と named し た raw ゴ ミ の microbes シ ス テ ム に お け を る micro-organisms, Lord に PCR - DGGE (polymerase chain reaction - denaturing gradient gel Electrophoresis) method を い て parsing し, with シ ス テ ム に お い て に lactic acid bacteria genera す る が main microbial bacteria と し て exist between the long-term stability and に し て い る こ と を Ming ら か に し た. し か し with に は, DNA extraction や PCR rights of と い っ た process に お い て バ イ ア ス が exist す る た め quantitative に owe け る と い う problem が あ る. ま た, 単 に DNA を 検 out し て い る だ け で あ る た め, す で に die out し た bacteria で あ っ て も 検 out さ れ て い る possibility が あ る. そ こ で FISH (fluorescence in situ Hybridization) method お よ を び quantitative PCR method with い る matter に よ り, コ ン ポ ス ト の inside micro-organisms 観 examine を line っ た. そ の results や は り microbial の half が lactobacillus で あ り, な お か つ live 発 に fertility し て い る, ま た, そ の off several polices の 経 variations of dynamic が confirm で き た. 2) ゴ ミ に containing ま れ る before turning な oily cent は コ ン ポ ス ト change に 悪 influence を and ぼ す こ と が に commonly known ら れ て い る. ア シ ド ロ コ ン ポ ス ト change に お い て oily cent の decomposition を promote さ せ る microbial species も し く は そ れ ら が production す る lipid decomposition enzyme を get す べ く, with コ ン ポ ス ト か ら の bacteria in vitro リ パ ー ゼ producing bacteria を ス ク リ ー ニ ン グ し た. Secretion is expected to strain が す の る enzyme properties を adjustable べ の た results with enzyme production す る リ パ ー ゼ は acid field に に to optimum pH を hold つ, novelty の high い も の で あ る こ と が Ming ら か に な っ た.

项目成果

中山 亨, 西野 徳三: "アシドロコンポスト化:臭気発生のほとんどない新しいコンポスト化プロセス"臭気の研究. 32(4). 210-216 (2001)

Toru Nakayama、Tokuzo Nishino：“酸性堆肥：一种几乎不产生气味的新堆肥工艺”Odor Research 32(4)。

N.Tsuruoka et al.: "Collagenolytic serine-carboxyl proteinase from Alicyclobacillus sendaiensis strain NTAP-1 : purification, characterization, gene doning, and heterologous expression"Appl. Environ. Microbiol.. 69(1). 162-169 (2003)

N.Tsuruoka 等：“来自仙台脂环酸芽孢杆菌菌株 NTAP-1 的胶原蛋白水解丝氨酸羧基蛋白酶：纯化、表征、基因捐赠和异源表达”Appl。