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乳酸菌による異種抗原の発現とワクチンへの応用

乳酸菌表达外源抗原及其在疫苗中的应用

基本信息

批准号：
13877041
负责人：
牧野壮一
金额：
$ 1.22万
依托单位：
Obihiro University of Agriculture and Veterinary Medicine
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至 2002
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-13877041/
关键词：
乳酸菌ワクチン豚丹毒炭疽粘膜免役粘膜免疫

项目摘要

感染症の予防にはワクチン開発が重要であるが、粘膜免疫を利用したワクチンは、経口・経鼻ワクチンとして投与方法も比較的容易であり、ワクチン開発が困難であると考えられている腸管感染症等に対しても効果が期待でき、次世代のワクチンとして注目されている。そこで、安全性が社会的にも長期間認知されてきた乳酸菌をワクチンベクターとして応用することにより、菌体内で異種抗原を発現させて粘膜免疫を刺激することでワクチンとして使用できるであろうと考えて本研究を企画した。1)防御抗原遺伝子の乳酸菌内への導入およびその発現。マウスをモデル動物として使用するために、マウスに明らかに病原性のある病原菌を使用した。炭疽菌および申請者等により同定され蛋白構造が明らかにされた豚丹毒菌の防御抗原(SpaA) (S-I. Makino et al.,Microb Pathog,25:101-109,1998.FEMS Microbiol Lett,186:313-317,2000.)を用いた。大腸菌とのシャトルプラスミドである乳酸菌用の発現プラスミドに発現可能なように挿入した。大腸菌での発現を確認後、エレクトロポレーション法により乳酸菌(Lactococcus lactis)を組換え体により形質転換し、防御抗原の発現を個々の抗体を用いて免疫学的に明らかにした。また、乳酸菌によりpHが下降し蛋白によっては不安定になることも予想されるので、培養温度や時間等を詳細に調べ、蛋白産生の至適条件を明らかにした。2)動物をモデルとした防御効果の検証。豚丹毒菌および炭疽菌の防御抗原を発現する乳酸菌をマウスに経鼻感染を行った結果、腸管内の特異的なIgA産生および血中における特異的IgGの有意な増加が確認された。豚丹毒菌に対しては攻撃試験を実施した結果、明らかな防御効果が確認できた(以上投稿準備中)。しかし、炭疽菌の培養液による攻撃試験では症状の経過が余りにも急激なため防御能が確認できなかった。そこで、芽胞を用いた攻撃試験で防御能があるかどうか確認中である。

It is important to prevent infectious diseases and use mucosal immunity It is relatively easy to invest in たワクチンは,経口・経biワクンとして. It is difficult to treat intestinal infection, etc. The effect of 対しても is expected, and the next generation is worth paying attention to.そこで、Safetyがsocial にもLong-term recognition されてきたlactic acid bacteria をワクチンベクターとして応用することにより、BacteriaでXenoantigen を発appearsさせてmucosal immunityをstimulationすることでワクチンとして useできるであろうとtestえてThis study was planned and planned. 1) The defense antigen is introduced into the lactic acid bacteria and appears.マウスをモデルAnimal として Use するために, マウスに明らかにPathogenic のあるPathogen を Use した. Anthrax erysipelas erysipelas defense antigen (SpaA) (S-I. Makino et al., Microb Pathog, 25: 101-109, 1998. FEMS Microbiol Lett,186:313-317,2000.)を用いた.大腸菌とのシャトルプラスミドである乳酸菌用の発現プラスミドに発現可能なように挿入した。 After confirming the presence of coliform bacteria, Lactobacillus lactic acid bacteria (Lactococcus) lactis) えbody morphology change し, defense antigen の発appear を individual 々のantibody をいてimmunology に明らかにした.また、Lactobacillus によりpHがDecreased protein によってはUnstable になることもYu want されYou can adjust the conditions, culture temperature, time, etc. in detail and determine the optimal conditions for protein production. 2) Evidence of the animal's defensive effect. The defense antigen of erysipelas anthracis and the lactobacilli lactobacillus anthrax are the result of nasal infection and intestinal infection The specific IgA in the tube is produced and the specific IgG in the blood is intentionally added and confirmed. The results of the attack test of Erysipelas arborealis and the confirmation of the defense effect of Akira (the above submission is in preparation).しかし、Anthrax culture solution によるattack test験では Symptoms の経pass が経りにも Rapid stimulation なためDefense ability がConfirmation できなかった. The そこで, the spores use the いた attack to test the defense ability, and the があるかどうかconfirms the success.