豚丹毒菌のヘモリジン遺伝子に関する遺伝学的および生物学的研究

猪丹毒溶血素基因的遗传与生物学研究

• 批准号: 08670296
• 负责人: 牧野 壮一
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Obihiro University of Agriculture and Veterinary Medicine
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08670296/
• 关键词: 豚丹毒; 溶血毒; 遺伝子

(1)Hly遺伝子の同定:大腸菌内で、シャトルベクターを用い、豚丹毒菌染色体の遺伝子ライブラリーを作製した。この際、親株として、豚丹毒羅患豚より分離され、かつ病原性を保持している事が確認されている豚丹毒菌を使用した。得られたライブラリー中より、羊血液寒天上にて溶血を呈するクローンを分離した。(2)Hly遺伝子の遺伝解析:各種制限酵素により遺伝子地図を作製し、Hly産生に必須の最小遺伝領域を特定した後、その全塩基配列を決定した。更に、データバンクを利用して、決定された塩基配列・アミノ酸配列を、他の細菌性Hlyの配列と比較したが、ホモロジーの高い配列は検出できなかった。(3)Hly遺伝子産物の解析:産生されるヘモリジンを用い、ウサギによる抗血清を作製した。しかし、大腸菌に困る抗血清作製は成功せず、現在、融合蛋白を遺伝子工学的に作製しウサギを免役しているところである。(4)Hly遺伝子の診断への応用:クローン化された遺伝子は、豚丹毒菌の一部の血清型に特異的に存在し、特に病原性の強いことが知られている菌株には一般的であった。このことは、今回クローン化した遺伝子が豚丹毒菌の病原性に強い菌株を検出する方法に利用可能であることが強く示唆された。(5)Hly非産生変異株の作製:Hly産生が、豚丹毒菌の病原性発現に関与しているか否かを明確にするために、Hly非産生変異株の作製を試みた。しかしながら、豚丹毒菌のDNAの形質導入が現時点では成功せず、種々の条件を検討している。以上の研究結果は現在投稿準備中である。

The main results are as follows: (1) the same definition of Hly oysters is as follows: intra-mycelium, dolphin and erysipelas chromosomes. The pathogenicity of porcine erysipelas, isolates, isolates and pathogenicity of swine erysipelas were identified and confirmed. The sheep's blood was cold and hemolytic in the sky, and the sheep's blood was separated. (2) Hly microarray analysis: each system restricts the production of enzymes to the ground, and the production of Hly must be based on a minimum range of specific parameters. Make use of this, decide that the basic configuration is acid-based, the bacterial Hly is better, the higher-than-normal, the higher-than-normal, the better. (3) the analysis of Hly antiserum: the antiserum was used as antiserum. The antiserum against E. coli and E. coli was used as a successful antiserum. At present, the fusion protein was used as an antiserum in the engineering of the fusion protein. (4) the use of Hly serotype and specific pathogenicity of serotype and pathogenicity of dolphin erysipelas. This time, the pathogenicity of dolphin erysipelas was detected, and the method was used to make use of the possibility that the pathogenic strains of dolphin erysipelas could be forcibly expressed. (5) Hly non-biotic strains were tested: the pathogenicity of Hly strains and dolphin erysipelas strains were detected and confirmed, and Hly non-biotic strains were tested. The time of entry of the virus, the DNA virus of porcine erysipelas, the time of arrival, the success rate and the condition of the virus were all tested. The results of the above studies are now being reviewed in preparation for submission.