脳神経系発生における紡錘系チェックポイントの役割

纺锤体系统检查点在颅神经系统发育中的作用

• 批准号: 13877123
• 负责人: 鈴木 薫
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Jikei University School of Medicine
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-13877123/
• 关键词: 神経幹細胞; 紡錘糸形成チェックポイント; Geminin; 分裂中期停止

妊娠14日のICRマウス終脳より、bFGF存在下で神経上皮細胞cell line(ICRNSC12)を確立した。この細胞を用い、はじめに3種類の紡錘糸形成阻害剤(Nocodazole, Taxol, Monastrol)の分化誘導能について検討した。神経細胞への分化については形態およびEGFP発現を指標にした。その結果、Nocodazoleは速やかに細胞のapoptosisを誘導したが、他の2剤についてはapoptosisの誘導は少なかった。特にMonastrolではapoptosisの誘導はほとんど認められなかったため、72時間暴露して神経系への分化について観察したが分化は認められなかった。紡錘糸チェックポイントはanaphase-promoting complex(APC)と呼ばれるubiquitin ligaseの機能を抑制して、APCの基質であるmitosis特異的蛋白の分解を抑制することにより、分裂後期以後の細胞周期の進行を抑制している。APC基質のひとつにGemininとよばれる蛋白が存在するが、この蛋白はDNA複製抑制作用を持つと同時に神経系初期発生において神経板形成領域の決定に作用すると考えられている。この作用はBMPシグナルの抑制作用によって達成されると考えられている。そこで神経系への分化抑制因子であるBMP4存在下でmonastrolによる分裂中期停止の効果について検討した。その結果monastrolを24時間暴露後にはEGFRの発現は増強し、monastrol暴露後、monastrol、BMP4無添加培地に戻した場合対象に比べ形態的にも神経系への分化が促進されていることがわかった。さらに紡錘糸形成チェックポイントのひとつのコンポーネントであるMad2をRNAi法でknock-downすると、この分化効果は失われることがわかった。このことは脳形成において紡錘糸形成チェックポイントが何らかの役割を担っている可能性を示唆している。現在in vivoで実際に紡錘糸形成チェックポイントが脳形態形成に関与しているかを確認するため、マウス全胚培養法を用いた研究を開始したところである。

On the 14th day of pregnancy, cell line (ICRNSC12) in the epithelial cells of ICR was confirmed in the presence of bFGF. The differentiation of Nocodazole, Taxol, Monastrol, which is caused by the use of drugs and drugs, can lead to a lot of changes in the system. God knows how to differentiate and shape EGFP to show that he is suffering from illness. The results show that the Nocodazole has a rapid response to the apoptosis response, and the other two are responsible for the apoptosis response. The special Monastrol apoptosis system instructs you to make sure that you don't need to be in the hospital, and that you have been exposed to the hospital for 72 hours, and that you have been exposed to it for 72 hours. The mechanism of anaphase-promoting complex (APC) is required to inhibit the function of ubiquitin ligase, the proteolysis of APC gene to inhibit the protein of mitosis, and the inhibition of cell cycle after post-mitosis. The presence of APC genes in Geminin proteins, the inhibition of DNA replication and the formation of biogenic plates in the early stage of the system determine the role of these proteins. BMP effect, inhibition effect, inhibition, inhibition. In the presence of BMP4, the differentiation inhibitor monastrol stops in the metaphase of division. The results showed that after monastrol exposure for 24 hours, the EGFR was stronger, and after monastrol exposure, monastrol and BMP4 were added to the culture environment to improve the differentiation of the health care system. The result of the formation of the Mad2 RNAi method of knock-down and differentiation is that the result is the loss of the virus. The possibility of the formation of the service cutting system indicates that it is possible to instigate the possibility of the formation of the system. At present, in the in vivo system, it is necessary to make sure that the whole embryo culture is in good condition, and the whole embryo culture method is used to start the study.