硫酸転位酵素遺伝子導入による異種糖鎖抗原の改変

通过磺基转移酶基因导入修饰异源碳水化合物抗原

• 批准号: 13877185
• 负责人: 宮川 周士
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-13877185/
• 关键词: 異種移植; GP3ST; 糖鎖抗原; α-galactosy1抗原; Hanganutziu-Deicher抗原; 薄層クロマトグラフィー免疫染色; 中性糖脂質; α-galactosyl抗原

硫酸転位酵素GP3ST(glycoprotein-3-sulfotransferase)を発現ベクターpCX(beta-actin promoter)に挿入し、ブタの血管内皮のline(MYP30)に遺伝子導入し、いくつかの安定株を樹立した。HPLCにて高い酵素活性が確認されたCell line, B4とB12、について以下の検討をした。コントロールには、α2,6sialyltransferase(ST)を用い、同じく高活性発現株を樹立した。細胞表面全体のヒトに対する抗原性の変化をヒト血清を反応させ、またα-galactosy1抗原の変化をGSIB4レクチンで染色し、FACSで調べた。ヒト血清に対しては、naiveなMYP30にたいし、B4は50%B12は34%、またSTは24%、GSIB4レクチンに対してはB4は66%、B12は50%、またSTは24%と抗原性が下がっていた。Hanganutziu-Deicher抗原の変化を抗H=D抗体(chiken poly clonal Ab)で調べた。B12もSTも約20%低下していた。また、ヒト血清にたいする細胞傷害率を検討した。結果はB4が70%程度が下がっていた。さらに、糖蛋白に関しては、ヒト血清を反応させたwestern、blotおよびGSIB4レクチン染色でB4,B12,STとも66Kda以下の蛋白の抗原の減少を確認した。糖脂質に関しては、同じくヒト血清とGSIB4を用いた薄層クロマトグラフィー免疫染色で解析し、5糖以上の中性糖で、B4,B12,またSTにも明らかな抗原性の低下を認めた。

The enzyme GP3ST (glycoprotein-3-sulfotransferase) was developed to introduce pCX(beta-actin promoter) into the vascular endothelial line(MYP30) and to establish stable plants. HPLC high enzyme activity was confirmed for Cell line, B4 and B12, and the following assays were performed. The high activity of α2,6sialyltransferase(ST) was also established. Antigenicity changes on the cell surface, serum changes, GSIB4 staining, FACS changes For example, if you are a child, you may be able to have a child. If you are a child, you may have a child. Hanganutziu-Deicher antigen was transformed into anti-H =D antibody (chiken poly clonal Ab). B12 ST is about 20% lower. The cell injury rate of the serum was investigated. As a result, B4 is 70% lower. In addition, the reduction of proteins below B4,B12,ST and 66Kda was confirmed by Western blot and GSIB4 staining. Glycolipids are related to serum and GSIB4. Immunostaining is used to analyze neutral sugars with more than 5 sugars, B4,B12, and ST to identify low antigenicity.

项目成果

M.Koma, S.Miyagawa, et al.: "The possihility of remodeling xenoantigen lenels by a novel Gal3-sulfotransferase CGP3ST"J. B. (Tokyo). (In press).

M.Koma、S.Miyakawa 等人：“通过新型 Gal3-磺基转移酶 CGP3ST 重塑异种抗原 lenels 的可能性”J。

M Koma, S Miyagawa, K Honke, R Nakai, R shirakura et al.: "The Possibility of Reducting of Xenoantigen Levels with a Novel Gal 3'-Sulfotransferase(GP3ST)"J Biochem.. 131. 517-522 (2002)

M Koma、S Miyakawa、K Honke、R Nakai、R shirakura 等：“用新型 Gal 3-磺基转移酶 (GP3ST) 降低异种抗原水平的可能性”J Biochem.. 131. 517-522 (2002)