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Fas Lのエピトープの同定と異種移植用トランスジェニック動物への応用

Fas L表位的鉴定及其在转基因动物异种移植中的应用

基本信息

批准号：
17659387
负责人：
宮川周士
金额：
$ 2.11万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至 2006
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-17659387/
关键词：
Fas Fas L NK細胞ブタ血管内皮細胞 I型蛋白 HLA-G PI-anchor dodon codon

项目摘要

Fas ligand (FasL)はFas発現細胞にapoptosisを誘導するII型の膜蛋白である。FasLおよび各種delation mutantをI型に遺伝子合成し、NK細胞の制御効果とその機能ドメインを異種移植の系(ヒトNK細胞-ブタ血管内皮細胞の系)で検討した。実際の構築としては、FasLの、細胞外ドメイン(N末端)より1-8 amino acid (AA),1-12AA,1-18AA,1-57AA,1-98AA,1-117AA,1-134AAおよび1-152AAに、HLA-Gの膜貫通部位(TM)に結合した形の分子(FasL-TM)を、哺乳類で頻度が高いcodonを選択しI型に遺伝子合成した。1-134AAおよび1-152AAに関しては、DAF(CD55)のPI-anchorを付けた分子も合成した。これらの合成FasLは血清中の酵素による切断部位をはずし、全例マーカーとして、FLAG-tagをN末端につけ加えた。次に、これらを発現vectorであるpCAGGSに組み込み、ブタ血管内皮細胞(PEC)に遺伝子導入し、各lineの発現をFACSで確認した。機能はFasL-TM型の発現細胞を使い、NK依存性PEC傷害に対する抑制効果を検討した。その際、NK細胞としては、YT細胞(NK-like cell line)を使用した。結果としては、1-57AA以上の全FasL-TMともブタの血管内皮上に高発現し、NK細胞抑制効果がみられた。しかし、1-8AA〜1-18AAについては不明に終わった。I型FasL分子の機能ドメインはN末端に限局し、NK細胞の制御に有効であることが示唆された。

Fas ligand (FasL) Fas showed that cytosolic apoptosis immunoreactivity led to type II membrane protein binding. FasL was used to synthesize all kinds of delation mutantI cells, and NK cells were used to control the transplantation. the results showed that all kinds of NK cells-vascular endothelial cell lines could be used in the production and control of MutantI cells. 1-8 amino acid (AA), 1-12AA, 1-18AA, 1-57AA, 1-98AA, 1-152AA, TM, FasL-TM, codon, I, 5, 3, 5, 3, 4, 3, 4, 3, 4, 4, 4, 4, 4, 3, 4, 4, 4, 4, 4, 4, 4, 4, 4, 4, 4, 4, 4, 4, 4, 4, 4, 4, 4, 4, 4, 6, 4, 4, 4, 4, 4, 4, 4, 4, 4, 4, 4, 8, 4, 4, 4, 4, 4, 3, 4, 4, 4, 4, 4, 4, 4, 4, 4, 4, 4, 4, 4, 4, 4, 4, 4, 3, 4, 4, 4, 6, 6, 6, 4, 6, 4, 4, 6, 6, 3, 3, 3, 4, 3, 4, 3, 4, 6, 4, 6, 4, 6, 4 1-134AA, 1-152AA, PI-anchor, DAF (CD55), molecular synthesis. The enzyme in the serum of the synthetic FasL, the enzyme in the cut site, the enzyme in the whole case, and the N-terminal enzyme in FLAG-tag were detected. In the second and third phase, we found that vector pCAGGS was detected, vascular endothelial cell (PEC) was detected, and FACS was confirmed by each line. The mechanism of FasL- TM type shows that the cell causes, the NK-dependent PEC damage effect inhibits the growth of the fruit. International, NK