補体制御因子による異種移植における超急性拒絶反応の抑制

补体调节剂抑制异种移植中的超急性排斥反应

• 批准号: 08671525
• 负责人: 宮川 周士
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08671525/
• 关键词: MCP; 3′UT; トランスジェニックマウス; CHD cell; CRI; RT-PCR

MCPに関しては、pCAGGS (chick beta actine promoter)にMCP(CD46)のIntactなcDNAと3′Untranslated Regionのないdelta-3′UT-MCPさらにcytoplasmic tail(CYT)部分を削ったdelta-CYT-MCPを挿入しトランスジェニックマウスを作成した。ScreeningはPCR及びSouthern blotにて確認し、免疫組織染色で発現の有無を検討した。RT-PCR法にてm-RNAも確認した。また上記3種類のplasmidをgene pulserにてCHO cellにtransfectionしclone化した後の発現をFACSにて検討した。RT-PCR法にてm-RNAも確認した。pCAGGS/Intact-MCPを導入したマウスでは臓器での発現は認めなかったのに対し(0/11)、delta-3′UT-MCPおよびdelta-CYT-MCP導入マウスでは明らかに臓器での発現を認めた(5/6,4/4)。CHOcellでの発現はin vivoのdetaと一致しIntact-MCPでは発現を認めなかった。in vivo,in vitroともどのタイプでもm-RNAを確認した。これらの結果から、MCPの遺伝子構築中3′UTの125bpにその発現を制御していることが明らかになった。CR1に関しては、function domainの8-11のをRT-PCR法にてクローニングし、DAF(CD55)のPI-anchor部分を接続し、CHOcellでの発現を確かめた。

MCPに关しては、pCAGGS (chick beta actine promoter)にMCP(CD46)のIntactなcDNAと3′Untranslated Regionのないdelta-3′UT-MCPさらにcytoplasmic The tail(CYT) part is made by cutting the delta-CYT-MCP and inserting it into the tail(CYT) part. Screening is done by PCR and Southern blot and confirmed by immunohistochemistry staining. Confirmation of m-RNA using RT-PCR method.またThe above three types of plasmid gene pulser CHO cell transfection clone and the subsequent FACS FACS. Confirmation of m-RNA using RT-PCR method. pCAGGS/Intact-MCP したマウスでは臓器 での発appears はcognize めなかったのに対し(0/11), delta -3′UT-MCP およびdelta-CYT-MCP import マウスでは明らかに燓器での発行を知めた(5/6,4/4). CHOcellでの発appearsはin vivoのdetaとconsistentIntact-MCPでは発appearsをcognizeめなかった. In vivo, in vitro, it is confirmed that m-RNA has been confirmed.これらのRESULTS から、MCPの缝子constructed 3′UTの125bp にその発appears をcontrol していることが明らかになった. CR1 is closed, the RT-PCR method of function domain is 8-11, the PI-anchor part of DAF (CD55) is connected, and the CHOcell is now correct.

项目成果

S.Miyagawa: "The Regulation of MCP (CD46) Expression in Transgenic mice : The Importance of The First 1256P of 3'Untromslated Region." Transplantation Proceedings. (in press). (1997)

S.Miyakawa：“转基因小鼠中 MCP (CD46) 表达的调节：3Untromslated 区域的第一个 1256P 的重要性。”