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視覚的な微生物群集の検出・遺伝子発見・基質代謝解析に不可欠な細胞壁処理技術の開発

开发视觉微生物群落检测、基因发现和底物代谢分析所必需的细胞壁处理技术

基本信息

批准号：
15656126
负责人：
大橋晶良
金额：
$ 2.18万
依托单位：
Nagaoka University of Technology
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至 2004
项目状态：
已结题

项目摘要

培養によらない微生物の遺伝子発現や代謝解析を行う上で非常に有用な手法の一つにFISH (Fluorescence in situ hybridization)法がある。しかしながらこれまでのFISH法は検出感度が遺伝子発現を解析するには不十分で、より高感度なFISH法、例えばCARD (catalyzed reporter deposition)-FISH法などの適用が考えられる。そこで本研究では、この高感度CARD-FISH法を用いるために必要不可欠な微生物の細胞壁処理方法について検討を行った。これまでにCARD-FISH法が適用されていないメタン生成古細菌に対して、CARD-FISH法を適用するための適切な細胞壁処理方法について検討した。その結果、幾つかのメタン生成古細菌について適切な細胞壁処理方法を酵素的消化により見いだす事ができた。しかしながら検討した全てのメタン生成古細菌について適切な処理方法を見いだす事ができず、酵素処理による細胞壁処理に限界をみた。一方でCARD-FISH法をより高感度にしたtwo-pass TSA-FISH法は、微生物の発現しているmRNAをオリゴヌクレオチドプローブを用いても十分に検出する事が可能である事を見いだし、遺伝子発現解析への布石を築いた。本研究から微生物の遺伝子発現解析を行うためのツールは揃いつつあるものの、それを適用するための前処理である細胞壁処理方法には未だ大きな課題が残っていることが判明した。これを克服する事が、今後の分子生物学的手法による微生物の培養によらない解析方法に一つのブレイクスルーをもたらす事ができると考えられ、今後更に検討を行っていく必要があると考えられる。

The FISH (Fluorescence in situ hybridization) method is very useful in the analysis of microorganisms. The FISH method was used to determine the sensitivity of the FISH method, the CARD (catalyzed reporter deposition)-FISH method, and the application of this method. In this study, the high sensitivity CARD-FISH method was used to determine whether it was necessary to use microorganisms, cell wall management methods, cell wall management methods, and so on. The CARD-FISH method was used to generate archaea, and the CARD-FISH method was used to cut the cell wall. The results showed that the cell wall was digested by the method of cell wall digestion and the digestion of enzymes. It is necessary to study the formation of archaea, the formation of bacteria, the formation of archaea, the formation of archaea, the formation of bacteria, the formation of archaea, the formation of archaea On the one hand, CARD-FISH method, high sensitivity method, two-pass TSA-FISH method, microbiological method, mRNA method, microbiological method, microbiological method, high sensitivity, high sensitivity, high sensitivity In this study, the microorganisms were divided into two groups: the microbes, the microbes, the microbes In the future, the methods of molecular biology, microbiology, molecular biology, molecular biology and molecular biology.