細菌人工染色体(BAC)DNAを用いた疾患感受性遺伝子スクリーニング法の開発

利用细菌人工染色体（BAC）DNA开发疾病易感基因筛查方法

• 批准号: 15659092
• 负责人: 高橋 智
• 金额: $ 1.09万
• 依托单位: University of Tsukuba
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 2004
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15659092/
• 关键词: 自己免疫疾患; 細菌人工染色体(BAC)DNA; トランスジェニックマウス; 疾患感受性遺伝子; 遺伝的多型; CD72; 細菌人工染色体(BAC) DNA

現在広く行われているプラスミドレベルの遺伝子断片の導入では、トランスジーンの挿入部位周辺の遺伝子発現の影響を強く受けること、ベクターの性質上、十分な発現制御領域をカバーできないことなどの問題点があり、しばしば導入遺伝子についての正確な情報を得ることができない。そこで本研究では、十分な発現制御領域をカバーできる細菌人工染色体(BAC)DNAを用いたトランスジェニックマウスを作製して、疾患感受性遺伝子を同定を行った。これまでの連鎖解析により、自己免疫疾患感受性の一つの候補遺伝子として想定されたCD72遺伝子が、疾患感受性遺伝子として機能しうるかどうかを明らかにするために、自己免疫疾患を発症するMRL/1prマウスに、抵抗性の多型を有するCD72 BAC DNAを遺伝子導入した。2系統の抵抗性多型のCD72BAC DNAを有したMRL/1prマウスと、コントロールとしてMRL/1prマウスと同様の感受性多型のCD72 BAC DNAを有したMRL/1prマウスを樹立した。これらのマウスを解析した結果、抵抗性多型BAC DNAを有するマウスでは、感受性多型のBAC DNAを有するマウスと比較して、寿命が著明に延長し、腎炎の改善を認めた。これらのマウスでの導入CD72の発現を解析したところ、正常のCD72の発現分布を示した。以上の解析結果から、連鎖解析によって同定されたCD72が実際に疾患感受性を決定していること、さらには導入したBAC DNAが生理的な発現を十分カバーできる領域を有していることが明らかとなった。従って、本研究によってBAC DNAを用いた、疾患感受性のスクリーニング方法が確立できたと考えられる。今後、これまで連鎖解析によって同定された他の疾患感受性遺伝子について、順次解析を行いたい。

Line now hiroo く わ れ て い る プ ラ ス ミ ド レ ベ ル の posthumous son 伝 fragment の import で は, ト ラ ン ス ジ ー ン の scions into parts weeks 辺 の posthumous son 伝 発 is の を strong く by け る こ と, ベ ク タ ー の nature, very な 発 now suppression area を カ バ ー で き な い こ と な ど の problem point が あ り, し ば し ば import legacy 伝 son に つ い て を の な correct information We get る とがで な な る. そ こ で this study で は, very な 発 now suppression area を カ バ ー で き る bacterial artificial chromosome (BAC) DNA を い た ト ラ ン ス ジ ェ ニ ッ ク マ ウ ス を cropping し て, disease susceptibility but 伝 を with fixed line を っ た. こ れ ま で の chain analytic に よ り, oneself immunity disease susceptibility の a つ の alternate heritage 伝 son と し て scenarios さ れ た CD72 heritage 伝 が, disease susceptibility posthumous son 伝 と し て function し う る か ど う か を Ming ら か に す る た め に, their immune disorders を 発 disease す る called simply MRL / 1 pr マ ウ ス に type, resistance の を す る CD72 BAC DNAを legacy 伝 is introduced into た. Type 2 system の resistance の CD72BAC を DNA し た called simply MRL / 1 pr マ ウ ス と, コ ン ト ロ ー ル と し て called simply MRL / 1 pr マ ウ ス と with others の susceptibility polymorphism の CD72 BAC を DNA し た called simply MRL / 1 pr マ ウ ス を set し た. こ れ ら の マ ウ ス を parsing し た results, resistance type BAC DNA を す る マ ウ ス で は, の BAC of susceptibility polymorphism DNA を す る マ ウ ス と compare し て, living longer し が zhao Ming に, nephritis の improve を め た. <s:1> れら ウスで ウスで ウスで ウスで <e:1> import CD72 cays occurrence を analysis <s:1> たと ろ ろ, normal distribution of <s:1> CD72 cays occurrence を shows た. Analytical results above の か ら, chain analytic に よ っ て with fixed さ れ た CD72 が be interstate に disease susceptibility を decided し て い る こ と, さ ら に は import し た BAC DNA が physiological な 発 を now very カ バ ー で き を る field have し て い る こ と が Ming ら か と な っ た. 従 っ て, this study に よ っ て BAC を DNA with い た, disease susceptibility の ス ク リ ー ニ ン が グ method established で き た と exam え ら れ る. In the future, <s:1> れまで will be linked to the analysis of によって and the corresponding された of the sensitive positoses of された other diseases, に 伝 て て て て, and then the sequence of the analysis will be を lines of を た た.

项目成果

Hirotsune S. et al.: "An expressed pseudogene regulates the messenger-RNA stability of its homologous coding gene"Nature. 423. 91-96 (2003)

Hirotsune S. 等人：“表达的假基因调节其同源编码基因的信使 RNA 稳定性”Nature。

Wakabayashi N, et al.: "Keap1-null mutation leads to postnatal lethality due to constitutive Nrf2 activation"Nat Genet.. 35. 238-245 (2003)

Wakabayashi N 等人：“Keap1 无效突变导致 Nrf2 组成型激活导致产后致死”Nat Genet.. 35. 238-245 (2003)

Morito N, et al.: "Nrf2-deficiency improves autoimmune nephritis caused by the fas mutation lpr"Kidney Int.. (in press).

Morito N 等人：“Nrf2 缺乏可改善由 fas 突变 lpr 引起的自身免疫性肾炎”Kidney Int..（正在印刷中）。

Moriguchi T, et al.: "Distinct response to dioxin in an arylhydrocarbon receptor (AhR)-humanized mouse"Proc Nat Acad Sci.USA.. 100. 5652-5657 (2003)

Moriguchi T 等人：“芳基烃受体 (AhR) 人源化小鼠对二恶英的独特反应”Proc Nat Acad Sci.USA.. 100. 5652-5657 (2003)

USAG-1 : A bone morphogenetic protein (BMP) antagonist abundantly expressed in the kidney.

USAG-1 ：一种骨形态发生蛋白 (BMP) 拮抗剂，在肾脏中大量表达。

• 发表时间: 2004
• 期刊: Biochem Biophys Res Commun. 316
• 作者: Yanagita M;et al.
• 通讯作者: et al.