RNAiレトロウィルスを用いた遺伝子ノックダウンマウス作製法の開発

利用RNAi逆转录病毒开发基因敲除小鼠生产方法

• 批准号: 18659074
• 负责人: 高橋 智
• 金额: $ 1.92万
• 依托单位: University of Tsukuba
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 2007
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-18659074/
• 关键词: レトロウイルスベクター; RNAi; トランスジェニックマウス; 遺伝子ノックダウン; トランスジェニクマウス

(1)受精卵に対するウイルスベクター導入方法の検定これまでの数少ない報告では、透明帯をタイロード液で除去した後にウイルス液に浸潤させ感染させる方法と、透明帯と受精卵の間の卵黄周囲腔にパッケージングしたウイルスを注入する方法が報告されているが、卵黄周囲腔にパッケージングしたウイルスを注入した方が効率が高いとの報告がある。そこで今年度は導入方法について検討した。サイレンシングを受けにくいモロニーウイルスベクターベースのレトロウイルスベクターでは遺伝子は、透明帯をタイロード液で除去した後にウイルス液に浸潤させ感染させる方法と、透明帯と受精卵の間の卵黄周囲腔にパッケージングしたウイルスを注入する方法の両方で、遺伝子がほとんど導入されないことが明らかとなった。GCDsapの遺伝子導入能力を確認するために、内部細胞塊と同様の性状を有するES細胞(129/Sv由来およびC57BL/6J由来)に蛍光タンパク質遺伝子を有するGCDsapを培養液中で感染させたところ、非常に効率良く遺伝子を導入すうことが出来た。従って現在のところ、1細胞期の受精卵でなぜ感染が起こらないかは不明であるが、胚盤胞期の受精卵にGCDsapをインジェクションする方法が有効である可能性がある。また、標準マウス系統であるC57BL/6JおよびNでレトロウイルスを用いた遺伝子導入を可能にするために、生殖細胞系列に伝達するES細胞を樹立するとともに、RNAiの検定が可能な蛍光物質恒常的に発現するC57BL/6J由来のES細胞を樹立した。研究計画(2)RNAiレトロウイルスを用いた遺伝子発現抑制の解析については遺伝子導入系が確立できなかったため、実施できなかった。

(1) the fertilized egg に す seaborne る ウ イ ル ス ベ ク タ ー import method の 検 set こ れ ま で の number less な い report で は, transparent 帯 を タ イ ロ ー で ド fluid to remove し た after に ウ イ ル に ス fluid infiltration さ せ infection さ せ と る method, transparent 帯 と fertilized egg の between の yolk weeks 囲 cavity に パ ッ ケ ー ジ ン グ し た ウ イ ル ス を injection す る methods が report さ れ て い る が , yolk weeks 囲 cavity に パ ッ ケ ー ジ ン グ し た ウ イ ル ス を injection し た party が sharper rate high が い と の report が あ る. Youdaoplaceholder0 で で the method for this year 's <s:1> introduction: に て検 て検 て検 discuss た. サ イ レ ン シ ン グ を by け に く い モ ロ ニ ー ウ イ ル ス ベ ク タ ー ベ ー ス の レ ト ロ ウ イ ル ス ベ ク タ ー で は heritage 伝 は, transparent 帯 を タ イ ロ ー で ド fluid to remove し た after に ウ イ ル に ス fluid infiltration さ せ infection さ せ と る method, transparent 帯 と fertilized egg の between の yolk weeks 囲 cavity に パ ッ ケ ー ジ ン グ し た ウ イ ル ス を injection す の る method The two sides で and the 伝 sub-son がほとん <s:1> import されな となった となった とが Ming ら となった となった. を GCDsap の posthumous son 伝 import ability affirms す る た め に, internal cell block と with others の traits are す を る ES cells (129 / Sv origin お よ び C57BL / 6 j origin) に 蛍 light タ ン パ ク qualitative heritage 伝 son を す る GCDsap を medium, で infection さ せ た と こ ろ, very に sharper rate good く heritage 伝 son を import す う こ と が out Come to た. 従 っ て now の と こ ろ, 1 cell の fertilized egg で な ぜ infection since が こ ら な い か は unknown で あ る が and stage blastoderm cell の fertilized egg に GCDsap を イ ン ジ ェ ク シ ョ ン す る が have sharper で あ る possibility が あ る. ま た, standard マ ウ ス system で あ る C57BL / 6 j お よ び N で レ ト ロ ウ イ ル ス を with い た posthumous son 伝 import を may に す る た め に, germ cell series に 伝 da す る を ES cells establish す る と と も に, RNAi の 検 may decide が な 蛍 light material constant に 発 now す る C57BL / 6 j origin の を ES cells establish し た . Research projects (2) the RNAi レ ト ロ ウ イ ル ス を with い た heritage 伝 son 発 is の に analytical つ い て は heritage 伝 son が import department to establish で き な か っ た た め, be で き な か っ た.

项目成果

Novel embryonic stem cells expressing tdKaede protein photoconvertible from green to red fluorescence.

表达 tdKaede 蛋白的新型胚胎干细胞可从绿色荧光转换为红色荧光。

• 发表时间: 2007
• 期刊: Int J Mol Med. 20
• 作者: Shigematsu Y.;et. al.
• 通讯作者: et. al.

Emblyonic stem cells derived from C57BL/6J and C57BL/6N.

胚胎干细胞源自 C57BL/6J 和 C57BL/6N。

• 发表时间: 2007
• 期刊: Biochem Biophys Res Commun. 364
• 作者: Tanimoto Y;et. al.
• 通讯作者: et. al.

Stable transgene expression in mice generated from retrovirally transduced embryonic stem cell.

由逆转录病毒转导的胚胎干细胞产生的小鼠中转基因的稳定表达。

• 发表时间: 2007
• 期刊: Gene Therapy. 15
• 作者: Hamanaka S;et al.
• 通讯作者: et al.