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RNAiレトロウィルスを用いた遺伝子ノックダウンマウス作製法の開発

利用RNAi逆转录病毒开发基因敲除小鼠生产方法

基本信息

批准号：
18659074
负责人：
高橋智
金额：
$ 1.92万
依托单位：
University of Tsukuba
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2007
项目状态：
已结题

项目摘要

(1)受精卵に対するウイルスベクター導入方法の検定これまでの数少ない報告では、透明帯をタイロード液で除去した後にウイルス液に浸潤させ感染させる方法と、透明帯と受精卵の間の卵黄周囲腔にパッケージングしたウイルスを注入する方法が報告されているが、卵黄周囲腔にパッケージングしたウイルスを注入した方が効率が高いとの報告がある。そこで今年度は導入方法について検討した。サイレンシングを受けにくいモロニーウイルスベクターベースのレトロウイルスベクターでは遺伝子は、透明帯をタイロード液で除去した後にウイルス液に浸潤させ感染させる方法と、透明帯と受精卵の間の卵黄周囲腔にパッケージングしたウイルスを注入する方法の両方で、遺伝子がほとんど導入されないことが明らかとなった。GCDsapの遺伝子導入能力を確認するために、内部細胞塊と同様の性状を有するES細胞(129/Sv由来およびC57BL/6J由来)に蛍光タンパク質遺伝子を有するGCDsapを培養液中で感染させたところ、非常に効率良く遺伝子を導入すうことが出来た。従って現在のところ、1細胞期の受精卵でなぜ感染が起こらないかは不明であるが、胚盤胞期の受精卵にGCDsapをインジェクションする方法が有効である可能性がある。また、標準マウス系統であるC57BL/6JおよびNでレトロウイルスを用いた遺伝子導入を可能にするために、生殖細胞系列に伝達するES細胞を樹立するとともに、RNAiの検定が可能な蛍光物質恒常的に発現するC57BL/6J由来のES細胞を樹立した。研究計画(2)RNAiレトロウイルスを用いた遺伝子発現抑制の解析については遺伝子導入系が確立できなかったため、実施できなかった。

(1)The method of determining the number of reports on the introduction of the fertilized egg into the vitelline cavity of the fertilized egg, the method of injecting the transparent fluid into the vitelline cavity of the fertilized egg, and the method of removing the transparent fluid from the fertilized egg The egg yolk cavity is filled with high levels of fat. This year, we will introduce a new method of investigation. The method of injecting the egg into the vitelline cavity of the fertilized egg is described in detail below. GCDsap gene transfer ability confirmed, internal cell mass and similar characteristics exist, ES cells (129/Sv origin and C57BL/6J origin), GCDsap gene transfer ability confirmed, GCDsap gene transfer It is possible that the method of GCDsap infection in blastoderm stage fertilized eggs is effective. C57BL/6J is a standard ES system that can be used for gene introduction, germ cell sequencing, and the establishment of ES cells derived from C57BL/6J. Research project (2)RNAi gene expression inhibition analysis and application of RNAi gene expression inhibition.