胚性幹細砲を用いた、心血管発生機構の解明、ならびに難治性心血管病における組織再生

利用胚胎干细胞阐明顽固性心血管疾病的心血管发育机制和组织再生

• 批准号: 15659185
• 负责人: 森下 竜一
• 金额: $ 2.11万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 2004
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15659185/
• 关键词: 胚性幹細胞; 血管内皮; 虚血性心血管病; 細胞移植; 細胞外基質; 血管新生因子; 血管内皮細胞; HGF

昨年度の研究で、胚性幹細胞(ES Cell)から、血管および心筋をin vitroの条件下で誘導すること確認した。本年度は、動物を用いた難治性心血管病のモデルにおいて、胚性幹細胞の分化誘導を利用した治療応用が可能か検討を行った。まず、細胞外基質matrigel内で、GFP遺伝子により蛍光を発現するES Cellを4日間培養し、さらに、その中で血管内皮前駆細胞のマーカーであるFLK陽性細胞をFACSを用いて分離した。ヌードマウスに下肢虚血モデルを作成し、分離培養したES Cellの細胞移植を行ったところ、虚血部位に形成された新生血管の一部に、蛍光を発する細胞が含まれることを確認した。血管内皮細胞のマーカー、PECAM-1で二重染色を行ったところ,共焦点マイクロスコープにてGFPおよびPECAM-1を発現していることを確認した。細胞移植2週間後には、細胞移植群において、血流の改善を認めたが、虚血組織内にES由来の細胞を確認できなかった。少なくとも、血管新生の早期にタイミングでは、ES Cellの細胞移植が虚血組織の血管新生に貢献しているものと考えられた。一方、心筋梗塞モデルで期待された、心筋への分化は、ES細胞移植後一週間の時点で、カルボニン、cardiac-actinとGFPとの2重染色を行ったが、その分化は確認できなかった。さらに、細胞移植を受けたレシーピエントにおいて、未分化なES Cellが含まれないか、未分化ES細胞のマーカーであるアルカリフォスフォターゼ(ALK)、やOCTの組織染色法を用いて、2週間の観察を行ったが、未分化ES細胞のコロニーは認めなかった。

Under the condition of last year's research, embryogenic cell (ES Cell) and vascular in vitro, we confirmed the disease. This year, animals and animals are used to treat cardiovascular diseases, and embryogenic cell differentiation is used to guide the use of drugs to treat cardiovascular diseases. After 4 days of incubation, matrigel, extracellular matrix matrigel, and GFP were isolated from ES Cell cells in 4 days. Cell culture, cell culture, and vascular endothelial cell culture were used to detect FLK positive cell FACS. The blood deficiency of the lower extremity was made, the cell transplantation of the ES Cell cell was performed, the blood deficiency site was formed, the neovascularization was formed, and the cell was confirmed. Double staining of vascular endothelial cells and PECAM-1 double staining were used to detect vascular endothelial cells, and the double staining of PECAM-1 was used to confirm the vascular endothelium. The double staining of vascular endothelial cells and double staining of PECAM-1 were performed in a common focus. After 2 weeks of cell transplantation, the blood flow of the cell transplantation group was improved, and the origin of ES in the empty blood tissue was confirmed. In the early stage of angiogenesis, the tissue of hypovolemic blood was grafted by ES Cell cell transplantation, and the tissue of hypovascular neovascularization was studied. On the other hand, the patients with myocardial infarction were expected to have heart failure, heart muscle differentiation, ES cell transplantation at one hour after transplantation, heart failure, cardiac-actin GFP double staining, and confirmation of heart failure by differentiation. Undifferentiated ES Cell, undifferentiated ES, undifferentiated ES, undifferentiated DNA, undifferentiated DNA.

项目成果

Morishita R: "Cardiovascular disease : gene therapy."The encyclopedia of the human genome. Nature publishing.. In press.

Morishita R：“心血管疾病：基因治疗。”人类基因组百科全书。

Morishita R: "Gene therapy in cardiovascular medicine : recent advances and perspectives."Drug and Today. In press.

Morishita R：“心血管医学中的基因治疗：最新进展和观点。”《药物与今日》。