ヒト肝細胞移植マウスにおけるHCV感染によるキャリア化と肝炎の誘導

移植人肝细胞的小鼠因 HCV 感染而诱发携带者状态和肝炎

• 批准号: 15659171
• 负责人: 高橋 祥一
• 金额: $ 2.18万
• 依托单位: Hiroshima University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 2005
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15659171/
• 关键词: ヒト肝細胞移植; uPA; scidマウス; キメラマウス; C型肝炎ウイルス; インターフェロン; ヒト肝細胞キメラマウス; HCV; C型肝炎ウィルス

【目的】小動物を用いたHCV感染モデルは確立していない。我々はヒト肝細胞をuPA/scid mouseに移植してhuman hepatocyte chimeric mice(以下キメラマウス)を作製し,HCVを感染させることにより肝炎ウイルスキャリア動物モデルの開発を行った。【方法】戻し交配により得られたuPA/scid mouse(2〜6週齢)に対して,生後9ヶ月のヒト肝細胞を経脾的に移植しキメラマウスが作製された。キメラマウスのヒト肝細胞置換率(以下キメラ率)は肝組織のサイトケラチン8/18による免疫染色およびマウス血中ヒトアルブミン濃度により算出し,HCV陽性患者血清を頚静脈より接種した。接種後2週間ごとに採血し,RT nested-PCRで感染成立を検討した。また,real-time PCRでそれぞれのウイルス量を定量的に測定した。【成績】キメラ率が20%未満ではウイルス血症の確認は困難であった。キメラ率30%以上のマウスでは非凍結血清の接種後2週目よりHCV感染成立および持続感染が確認され、10^4-10^6copy/mlのウイルス血症が最長10週間持続した。凍結保存した血清では同様のキメラ率のマウスに接種した場合でも,感染性が失われることもあり,検体保存に注意を要した。組織学的検討ではヒトアルブミン陽性細胞(ヒト肝細胞)はコア抗原、NS5A陽性(HCV感染細胞)であり、置換されたヒト肝細胞に特異的にHCVが感染し、複製していることが確認された。HCVに対する抗ウイルス効果をみるために,HCVの感染が成立したキメラマウスにIFNαの筋肉内投与を行ったところ,投与2-4週間で3-5LogのHCVウイルス量の低下を認め,投与中止によりHCVウイルス量は前値まで回復した.本キメラマウスはscidマウスであることより,今回のIFN投与によるウイルス量の低下は,免疫機構を介したウイルスの排除ではなく,IFNが直接肝細胞に作用して抗ウイルス作用を持つ物質を誘導していることが示唆された.

[Objective] HCV infection in small animals was established. We have been trying to control HCV infection by transplantation of uPA/scid mouse into human hepatocyte chimeric mice. [Methods] UPA/scid mice (2 ~ 6 weeks old) were obtained after mating, and liver cells were transplanted 9 months after birth. The liver cell replacement rate (hereinafter referred to as the "rate") was calculated by immunostaining of liver tissue 8/18, and the serum of HCV positive patients was inoculated intravenously. At 2 weeks after inoculation, blood samples were collected and RT nested-PCR was used to detect infection. Real-time PCR was used to quantify the amount of DNA. [Results] HCV infection was established 2 weeks after vaccination with non-frozen serum and the infection was confirmed 10^4- 10^6 copies/ml and the infection lasted for up to 10 weeks. Freezing the serum is the same as the rate of inoculation, and the infectivity is lost. Histological examination confirmed that the specific HCV infection and replication in the replaced hepatocytes were confirmed by the presence of HCV antigen and NS5A positive cells (HCV-infected cells). HCV infection was established and IFNα was administered intramuscularly. HCV infection decreased by 3- 5 logs in 2-4 weeks after administration. HCV infection recovered after administration. The IFN dose is low, and the immune system is involved in the elimination of IFN. IFN directly acts on hepatocytes, and its anti-IFN action is induced by substances.