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天疱瘡自己抗体の病的活性測定法の開発

天疱疮自身抗体病理活性测定方法的建立

基本信息

批准号：
15659266
负责人：
天谷雅行
金额：
$ 2.11万
依托单位：
Keio University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至 2004
项目状态：
已结题

项目摘要

尋常性天疱瘡患者血中には、細胞間接着因子であるデスモグレイン3(Dsg3)に対する抗体が存在し、その抗体が表皮細胞接着を阻害し、水疱形成を誘導することが明らかにされている。病勢の指標として、蛍光抗体法間接法やELISA法で測定された抗体価が使用されている。しかしながら、これらの方法で得られる抗体価は、個々の抗体の細胞間接着阻害能を直接示す値ではない。本研究の目的は、天疱瘡患者血清中自己抗体の細胞間接着阻害活性を測定するin vitroの検査法を開発することである。正常ヒト表皮由来ケラチノサイトをシート状に培養し、抗Dsg3モノクローナル抗体、あるいは患者血清を添加後、細胞シートをピペッティングによる機械的ストレスを加え、分断された細胞集塊数を計測し、細胞接着阻害活性の指数(Dissociation Score : DS)とした。天疱瘡モデルマウスより単離されたモノクローナル抗Dsg3抗体を用いて検討したところ、明らかに病的活性を持つ抗体AK23で処理をした細胞シートは、多数の細胞塊に分断されたのに対し、マウスモデルで明らかな病的活性を示さない抗体AK20で処理した細胞シートは分断されなかった。次に、患者血清を用いて検討したところ、活動期の天疱瘡患者血清(n=10)の平均DSは42.2、正常人血清(n=5)の平均DSは、15.6であり、有意に患者血清は高いDS値を示した。さらに、Dsg3 ELISA値が同程度で、活動期の患者血清(n=3)、寛解期の患者血清(n=3)を比較すると、活動期の患者血清において、DS値は、27〜60と高値を示したのに対し、寛解期の患者血清におけるDS値は10〜20と低値を示しELISA値よりも病勢を正確に反映する値が得られた。以上より、本検査法は、天疱瘡自己抗体の細胞間接着阻害活性を測定する簡便で客観的な測定法となると考えられた。

In patients with pemphigus vulgaris, there are antibodies against intercellular adhesion factor 3(Dsg3), which prevents epidermal cell adhesion and induces blister formation. Disease indicators, indirect light antibody method and ELISA method were used to determine the antibody level. This method provides a direct indication of the cell-to-cell adhesion resistance of antibodies. The purpose of this study was to develop an assay for the determination of cell-to-cell inhibitory activity of antibodies against individuals in sera from patients with pemphigus. Normal epidermal origin, anti-Dsg3 antibody, addition of patient serum, cell differentiation, measurement of the number of cell aggregates, and index of cell adhesion inhibition activity (Disassociation Score : DS). Anti-Dsg3 antibodies were used to detect and detect the activity of anti-Dsg3 antibodies. The mean DS of serum from patients with pemphigus (n=10) in active phase was 42.2, that of serum from normal subjects (n=5) was 15.6, and that of serum from patients with pemphigus (n= 10) in active phase was 15.6. Dsg3 ELISA values were the same, serum from patients in active phase (n=3), serum from patients in remission phase (n = 3), serum from patients in remission phase (n=3), serum from patients in active phase (n= 3), serum from patients in remission phase (n = 3), serum from patients in active phase (n = 3), serum from patients in remission phase (n = 3), serum This assay is a simple and convenient method for measuring the cell-to-cell binding inhibitory activity of pemphigus antibodies.