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培養細胞を用いた、生体時計関連遺伝子の多型の機能解析法の開発

开发利用培养细胞进行生物钟相关基因多态性功能分析的方法

基本信息

批准号：
15659270
负责人：
海老澤尚
金额：
$ 2.11万
依托单位：
The University of Tokyo (2004)Saitama Medical University (2003)
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至 2004
项目状态：
已结题

项目摘要

Rat-1細胞に生じた体内時計機能を観察するため、1,000,000個のRat-1細胞を35mmディッシュにまいた24時間後、ヒトBmall遺伝子のプロモーターをルシフェラーゼ遺伝子の上流に組み込んだレポータープラスミドpGL3-Bmal1P-PESTを導入し、48時間後に0.1μMのDexamethasoneで2時間刺激し、微弱発光測定装置で発光量の変化を測定した。その結果、ほぼ一定の24時間周期で発光量が増減するのが観察された。この発光量の変化は、Dexamethasoneで刺激しない場合は出現しなかった。従って、このシステムにより体内時計機能を測定できることが示された。また、他の時計遺伝子のプロモーターを組み込んだプラスミドをRat-1細胞に組み込みDexamethasoneで刺激した場合、異なった時間的位相で発光量が変化することを見出した。従ってルシフェラーゼ遺伝子の上流に様々な時計遺伝子のプロモーター配列を組み込むことで、各時計遺伝子がどのような転写調節を受けているか、この系で確認できることが見出された。平行して、Rat-1細胞に時計遺伝子多型をノックインするためのベクター開発を行った。ラットゲノムDNAからcasein kinase1 epsilon(CK1ε)遺伝子をクローニングした。今後、ヒトにおいて概日リズム障害発症の抑制因子となるCK1ε遺伝子のS408N多型を、クローニングしたラットCK1ε遺伝子に導入する予定。

Rat-1 cells were cultured for 24 hours, and then 1,000,000 Rat-1 cells were cultured for 24 hours. After introduction of pGL3-Bmal1P-PEST, the amount of Dexamethasone stimulated for 2 hours, and the amount of light emitted by the weak light measuring device was measured. As a result, it was observed that the amount of light emitted during a certain 24-time period decreased. The amount of light emitted is changed, and Dexamethasone is stimulated. In vivo chronometer function measurement is performed on a variety of subjects. When Rat-1 cells are stimulated by Dexamethasone, the amount of light emitted from them changes at different times. The upper part of the clock is connected to the upper part of the clock, and the upper part of the clock is connected to the lower part of the clock. Parallel, Rat-1 cell chronometer gene polymorphism development DNA casein kinase1 epsilon(CK1ε) gene In the future, the introduction of CK1 ε gene into the S408N polymorphism of CK1 ε gene is expected.