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新たに見出されたメラトニン受容体グループに属する、未知の受容体遺伝子の単離

属于新发现的褪黑激素受体组的未知受体基因的分离

基本信息

批准号：
07770799
负责人：
海老澤尚
金额：
$ 0.51万
依托单位：
Saitama Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

高親和性メラトニン受容体グループに属する未知の受容体遺伝子の一部と思われる遺伝子断片を単離することに成功した。既に単離されているヒト,ヒツジ,アフリカツメガエルの高親和性メラトニン受容体遺伝子の配列の中で,他の受容体とは異なっている,特徴のある領域の配列を元に,約20merのオリゴヌクレオチドを作成した。このオリゴヌクレオチドをプライマーとして使用し,ラット脳から描出したmessenger RNAから合成したcDNA,及びラットのgenomic DNAを鋳型として低いannealing temperatureでPCR法を行った。annealing temperatureやオリゴヌクレオチドの組合せを変え,何種類かの異なる条件下でPCRを施行し,PCR産物をクローニングベクターpCRIIに挿入してから,competent cell ; INV αF'に導入し,プラスミドを精製して核酸配列を決定した。その核酸配列を遺伝子解析ソフトウェアーBLASTで検索したところ,高親和性メラトニン受容体Mel la, Mel lbのアミノ酸配列と40-45%の一致を示すが,未だGenBankなどに登録されていない,未知の受容体遺伝子の一部と思われる遺伝子断片が単離できたことが判明した。この遺伝子断片は,高親和性メラトニン受容体グループに属する新規の受容体遺伝子の一部と思われる。今後は,既述した方法や他の方法を組み合わせることにより,さらに他の未知の受容体を発見する試みを続ける。また,得られた受容体遺伝子断片の全長遺伝子を単離し,培養細胞に発現させて,メラトニンと結合するかなど薬理学的性質を調べるほか,ノーザンブロット法などによりその組織分布を調べる予定である。

A part of the high affinity receptor fragment was successfully isolated from the unknown receptor fragment. The high affinity medium of the receptor gene is composed of the receptor gene, the receptor gene and the characteristic domain gene, and the receptor gene is composed of about 20mer. The PCR method was performed at a low annealing temperature. PCR is performed under different conditions,PCR products are introduced into the competent cell ; INV αF'and purified under different conditions. The nucleotide sequence analysis software for the sequence analysis of the receptor Mella, Mellb showed a 40-45% identity with the sequence analysis of the high-affinity receptor Mella, Mellb, and some of the unknown receptor sequences were not registered in GenBank. This gene fragment is a part of the new receptor gene family with high affinity. In the future, both methods described above and other methods will be combined, and other unknown substances will be discovered. In addition, full-length fragments of receptor fragments were isolated, and the development of cultured cells was studied. The biological properties of the receptor fragments were adjusted. The tissue distribution of the receptor fragments was determined by the method of hybridization.