細胞工学的改変ミクログリアによる中枢神経系疾患の治療・診断に関する研究

利用细胞工程小胶质细胞治疗和诊断中枢神经系统疾病的研究

• 批准号: 15659340
• 负责人: 清水 惠司
• 金额: $ 2.18万
• 依托单位: Kochi University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 2004
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15659340/
• 关键词: ES細胞; ミクログリア; 血液脳関門(BBB); 中枢神経; マクロファージ; 細胞工学; MHC class II

我々は,enhanced green fluorecent protein(eGFP)発現遺伝子を導入したマウス胚性幹細胞(ES細胞)からマイクログリアの分化誘導法を確立した(J.Neuroimmunol.2005,160,210-218).マイクログリアへの分化誘導は,神経細胞誘導法である5-STEP法を一部改変した.Embryoid Body(EB)にbFGFを添加し,その後付着培養する際にGM-CSFを添加することによりマイクログリアを誘導した.FACS解析によりCD45^<low>,Mac1^+の細胞をマイクログリアとし,CD45^<hi>,Mac1^+の細胞をマクロファージとしたところ,誘導細胞はそれぞれ17%と2%であった.誘導マイクログリアのMHC,共刺激分子や接着分子の発現をFACSで解析すると,MHC class I, class II分子を発現しており,共刺激分子であるCD80,CD86やCD40の発現が認められた.また,IFN-g刺激によりMHC class IIとCD40の発現上昇もみとめられた.接着分子の発現は,脾臓マクロファージと比べほとんどが低く,CD31のみが高かった.また正常マウス尾静脈に誘導マイクログリアを移植すると,血液脳関門を通り抜け海馬,脳梁に移植細胞が遊走する事が確認された.しかし末梢の組織では,移植細胞はほとんど検出されなかった.さらに誘導マイクログリアを同様にグリオーマモデルマウスに移植すると,腫瘍組織に多数の移植細胞が確認された.この特性を利用して,細胞工学的改変ミクログリアによる中枢神経系疾患の治療法を開発している.

I 々,enhanced green fluorecent Protein (eGFP) 発 now heritage 伝 son を import し た マ ウ ス embryonic stem cells (ES cells) か ら マ イ ク ロ グ リ ア の differentiation candidated を establish し た (j. euroimmunol. 2005160210-218). The マ イ ク ロ グ リ ア へ の induction は, god 経 cells candidated で あ る 5 - ST The EP method を is modified to た.Embryoid. Body (EB) に bFGF を add し, そ の after paying the cultivating す る interstate に gm-csf を add す る こ と に よ り マ イ ク ロ グ リ ア を induced し た. Both FACS parsing に よ り CD45 ^ < low >, Mac1 ^ + の cells を マ イ ク ロ グ リ ア と し, CD45 ^ > < hi, Mac1 ^ + の cells を マ ク Youdaoplaceholder0 ロファ ジと たと たと ろ ろ, induced cells たと それぞれ17%と2%であった. Induced マ イ ク ロ グ リ ア の MHC, total stimulus や then molecules の 発 を now both FACS で parsing す る と, MHC class I, Class II molecules を 発 now し て お り, total stimulus molecule で あ る CD80, CD86 や CD40 の 発 が now recognize め ら れ た. ま た, IFN - g stimulus に よ り MHC class II と CD40 の 発 now rising も み と め ら れ た. Then molecular の 発 は, splenic マ ク ロ フ ァ ー ジ と than べ ほ と ん ど が low く, CD31 の み が high か っ た. ま た normal マ ウ ス caudal vein に induced マ イ ク ロ グ リ ア を transplantation す る と, blood 脳 door of masato を り sorting け seahorses, 脳 beam に transplanted cells が wander す る が sure さ れ た. し か し endings の organization で は, transplanted cells は ほ と ん ど 検 out さ れ な か っ た. さ ら に induced マ イ ク ロ グ リ ア を with others に グ リ オ ー マ モ デ ル マ ウ ス に transplantation す る と, swollen sores organization に most の transplanted cells が confirm さ れ た. こ の features を using し て, cell engineering change - ミ ク ロ グ リ ア に よ る central god 経 の system disease therapy を open 発 し て い る.

项目成果

Characterization of microglia induced from mouse embryonic stem cells and their migration into the brain parenchyma

• DOI: 10.1016/j.jneuroim.2004.10.025
• 发表时间: 2005-03
• 期刊: Journal of Neuroimmunology
• 影响因子: 3.3
• 作者: Takahiro Tsuchiya;K. Park;S. Toyonaga;S. Yamada;H. Nakabayashi;E. Nakai;Naoki Ikawa;M. Furuya;A. Tominaga;K. Shimizu