アデノウイルスベクターを用いた神経伸長因子遺伝子導入による鼻粘膜嗅上皮の再生

腺病毒载体导入神经生长因子基因促进鼻粘膜嗅上皮再生

• 批准号: 15659404
• 负责人: 鈴木 誉
• 金额: $ 2.05万
• 依托单位: Chiba University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 2004
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15659404/
• 关键词: アデノウイルスベクター; BDNF; 嗅上皮

マウス嗅上皮除去後の嗅上皮に対する、アデノウイルスベクターを用いた遺伝子導入を検討するとともに、神経栄養因子の一つである、brain-derived neutrotrophic factor(BDNF)を発現させ、嗅細胞の細胞死に与える影響を検討した。マウスの嗅球を除去し、β-galactosidase(β-gal)発現アデノウイルスベクターを全身麻酔下に、6-9週齢のBALB/cマウスに点鼻投与した。投与後5、8、14、28日目に鼻中隔を摘出し、X-gal染色を施行しβ-galの発現の変化を検討した。さらに、マウスの嗅球を除去し、BDNF発現アデノウイルスベクターを点鼻投与し、3、5、8、14、28日目に鼻中隔を摘出し、凍結組織切片を作成し、H-E染色にて嗅細胞層の高さを測定し、蛍光抗体法、TUNEL法を用いて嗅上皮におけるBDNFの発現と効果をを比較、検討した結果、β-galは投与後5日目では嗅上皮において連続した強い発現を認めた。その後発現は減弱し、14日目では呼吸上皮との境界付近にわずかに発現を認める程度であった。BDNF発現アデノウイルスベクター投与群では、未成熟細胞と基底細胞と考えられる残存している嗅細胞にBDNFの発現を認め、対照群と比較すると3日目にはアポトーシス細胞数は有意に減少し、5日目まで嗅細胞層の減少を抑制した。成熟マウスの嗅上皮においてアデノウイルスベクターが効率よく遺伝子発現をすることは以前より報告されていた。本研究では、嗅球を除去することにより障害を受けている嗅上皮においても発現時間の減少は認めるが遺伝子導入がかのうであり、さらにBDNFを持続的に発現させることにより、嗅細胞の細胞死が抑制されることを示した。これによりアデノウイルスベクターを用いたBDNF発現の嗅細胞保護・再生への応用が期待された。

To investigate the effects of olfactory epithelium on the development of neurotrophic factors, brain-derived neurotrophic factor(BDNF), cell death and apoptosis of olfactory cells. In addition, β-galactosidase(β-gal) was found in the olfactory bulb at 6-9 weeks. 5, 8, 14 and 28 days after injection, the nasal septum was extracted, X-gal staining was performed, and the development of β-gal was discussed. To compare and discuss the effects of BDNF development in olfactory epithelium by H-E staining, fluorescence antibody method, TUNEL method and nasal septum extraction on day 3, 5, 8, 14 and 28. The β-gal was injected into the olfactory epithelium 5 days later. The respiratory epithelium is close to the surface and the degree of development is low. BDNF expression in olfactory cells was significantly reduced on the 3rd day compared with the 3rd day compared with the 5th day compared with the 3rd day compared with the 3rd day compared with the 5th day. It is the first time that a woman has ever been born. This study shows that olfactory bulb removal is a barrier to olfactory epithelium development and that olfactory cell death is inhibited by gene introduction. This is the first time that BDNF has been used to develop olfactory cell protection and regeneration.