非分解性と信じられているプラスチックの分解酵素遺伝子のクローニング

克隆塑料降解酶基因，该酶被认为是不可降解的

• 批准号: 16656258
• 负责人: 片倉 啓雄
• 金额: $ 2.24万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2004
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2004 至 2005
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-16656258/
• 关键词: 生分解性プラスチック; ポリスチレン; 蛍光偏光法; ポリ乳酸; プラスチック分解酵素; 付加解裂型連鎖移動反応; アミノエタンチオール

1.ポリ乳酸分解菌の単離と分解酵素の精製平均分子量5000のポリ乳酸をカルボジイミド法によってFluorescein aminoacetamideで標識し、GPCで精製することによって蛍光標識ポリ乳酸(F-PLA)を得た。ポリ乳酸粉末を埋設し、数ヶ月放置した土壌に含まれるポリ乳酸分解酵素活性をF-PLA溶液の蛍光偏光度の減少によって測定したところ、有意に高い活性が確認された。ポリ乳酸微粉末を含む寒天培地に形成されるハローを指標にこの土壌からポリ乳酸分解菌を3種類単離した。16SrDNAの配列解析の結果、これらはStreptomyces属、Burkholderia属、もしくはProteobacterium属の微生物であると考えられた。この分解菌このうち、酸性pHでもポリ乳酸分解活性を示したStreptomyces属の微生物を培養し、その培養上清からPLA分解酵素の精製を試みた。この分解酵素は分解されやすいためまだ完全に精製するには至っていないが、分子量45k程度のプロテアーゼであると考えられる。2.蛍光標識ポリスチレンの合成スチレンおよびスチレンスルホン酸をエチレングリコール/メタノール溶液(1:1)に溶解し、azobisisobutyronitriteとアミノエタンチオールを加え、減圧下、60度で24時間反応させて重合させた。スチレンとスチレンスルホン酸の比率を変えることによってポリマーの親水性を、アミノエタンチオールの比率を変化させることによってポリマーの分子量を操作した。この反応によって、末端に導入されたアミノ基を、カルボジイミド法によってFluorescein aminoacetamideで標識し、蛍光標識ポリスチレンを得た。現在、これを用いてポリスチレン分解菌の単離と分解酵素の精製を行っている。

1. Purification of F-PLA from isolated enzyme of polylactis with average molecular weight of 5000. Identification and purification of F-PLA by GPC. Determination of the decrease in the polarization of F-PLA solution due to the presence of lactic acid powder in the soil for several months The lactic acid micro-powder is composed of three kinds of lactic acid decomposing bacteria. The results of 16S rDNA alignment analysis showed that the genus Streptomyces, genus Burkholderia and genus Proteobacteria were closely related. The activity of lactic acid decomposing bacteria was measured by pH value, and the culture supernatant of Streptomyces was purified. The enzyme is decomposed and purified completely, and its molecular weight is 45k. 2. Light identification of the synthesis of the compound of the compound The ratio of acid to water is changed. The fluorescent dye and fluorescent dye were introduced into the reaction mixture. The fluorescent dye and fluorescent dye were used to identify the fluorescent dye. Now, the process of purification of decomposing bacteria and enzymes is carried out.

项目成果

ポリマーの分子量変化の分析方法、およびその方法に用いる蛍光標識化合物

分析聚合物分子量变化的方法以及该方法中使用的荧光标记化合物

• 发表时间: 2002