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植物の根表層工学の開発

植物根表面工程的发展

基本信息

批准号：
16656259
负责人：
吉田和哉
金额：
$ 2.24万
依托单位：
Nara Institute of Science and Technology
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至 2005
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-16656259/
关键词：
植物細胞壁結合タンパク質細胞壁結合性アミノ酸領域セルロース結合ドメインペルオキシダーゼファイトレメディエーション分泌シグナルペプチドタバコ培養細胞西洋ワサビペルオキシダーゼ白色腐朽菌Mnペルオキシダーゼ高効率翻訳領域

项目摘要

目的タンパク質を細胞外分泌した後、細胞壁にトラップすることが可能になれば、環境浄化酵素の機能を引き出す上で有効であると考えられる。PRXによるフェノールの除去は、植物細胞壁にフェノールが酸化重合されることにより行われるが、このような反応系では、PRXを細胞壁に固定化することで細胞壁へのフェノール結合効率の上昇が期待される。細胞壁結合ドメインとしてArabidopsis thaliana EXP1由来Cellulose Binding Domain(CBD)およびNitociana tabacum TLRP由来Cys-rich Domain(Cys-D)の利用を検討した。まず、細胞壁結合ドメインを融合した組み換えタンパク質を植物体根に添加し、各ドメインの機能評価を行う。緑色蛍光タンパク質(EGFP)をレポーターとして用い、各組み換えタンパク質を発現するための遺伝子構築を行った。大腸菌に導入後、IPTGによる転写誘導を行い、各組み換えタンパク質が生産されることを確認した。現在、各組み換えタンパク質の大量生産および精製を行う。植物細胞壁に各組み換えタンパク質を添加し、緑色蛍光を見ることで細胞壁との結合性を評価を行っている。次に、CBDもしくはCys-DとHRP C1aの融合遺伝子にN末端分泌シグナルペプチドコード領域を融合した各遺伝子を、アグロバクテリウム法によりタバコ培養細胞に導入した。得られた形質転換カルスからタンパク質サンプルを調製して等電点電気泳動およびペルオキシダーゼ活性染色を行い、HRP C1aを発現するクローンを選抜した。これらのうち、Cys-D発現細胞の培地上清および細胞可溶性画分を調製し、等電点電気泳動を行い、細胞内と培養上清の両方に組換えタンパク質の生成が確認された。

Purpose: It is possible to use extracellular secretion and cell wall secretion The functions of environmental purification enzymes are as follows: PRX によるフェノールの Remove は、Plant cell wall にフェノールがAcidification overlap されることにより行われるが、このIt is expected that the binding efficiency of ような reaction system and PRX immobilized cell wall and cell wall will increase. Cell wall binding ドメインとしてArabidopsis thaliana EXP1 origin Cellulose Binding Domain (CBD) およびNitociana tabacum TLRP origin Cys-rich Domain (Cys-D) のutilization を検した.まず, cell wall binding ドメインをfusion したgroup みchange えタンパクquality をplant root にadd し, each ドメインのfunctional evaluation価を行う. Green EGFP green をレポーターとして uses い, and each group's みタンパクquality を発appears するための缝子constructs を行った. After the introduction of coliform bacteria, the IPTG program was used to induce induction, and the quality of each group was changed and the production was confirmed. Now, each group has changed its quality to mass production and refined quality. Each group of plant cell wall has a different quality and added quality, and a green larvae has been added to the cell wall and its binding properties have been evaluated. Tsuru, CBDしくはCys-DとHRP C1a fusion gene N-terminal secretory secretion domain fusion The method of introducing the cultured cells using the たグロバクテリウム method was used. Get the られたmorphous substance 転change the カルスからタンパク性サンプルをmodulated して, etc. Electrophoresis electrophoresis, HRP C1aを発行するクローンを选抜した.これらのうち, Cys-D 発appears the cell's cultivation of the ground clearing および cell soluble draw を modulation し, isoelectricity The conduction of spot electrophoresis and preparation of the culture supernatant in the cells was confirmed by the replacement of the culture medium.