SH3ドメインに高親和性・特異的ペプチドの立体構造に基づいたライブラリデザイン

基于对 SH3 结构域具有高亲和力和特异性的肽 3D 结构的文库设计

• 批准号: 16657045
• 负责人: 神田 大輔
• 金额: $ 1.09万
• 依托单位: Kyushu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2004
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2004 至 2005
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-16657045/
• 关键词: SH3ドメイン; プロリンリッチ配列; ファージディスプレイ; 環状ペプチド

SH3ドメインはプロリンリッチ配列(PXXP配列)に結合するドメインである。市販のファージライブラリPh.D.-C7Cファージディスプレイペプチドライブラリキット(BioLabs社)を用いて,p67^<phox>蛋白質のSH3ドメインに結合するペプチドを選択した.p67^<phox>蛋白質のSH3ドメインをGST融合タンパク質として大腸菌を用いて発現・精製した.Glutathione coated96穴HS plateプレートを用いてGST部分でプラスチックに結合させ,方向が制御された状態の固相化をおこなった.また,溶液中での選択を行うためGST Magnet Agarose Beadsを用いてプルダウンを行った.特異的に吸着したファージを溶出し、大腸菌に感染させ、プラークを得た。このパンニング操作を3回繰り返した。結果はファージELISAを使って確認した.ファージライブラリPh.D.-C7Cペプチドライブラリキットは,7残基のランダムライブラリであり,両端のシステインがSS結合を形成して環化している.PXXPを含む配列が繰り返し得られた.得られた4つのアミノ酸配列をペプチド合成し,SS結合を作らせて環化した.質量分析とDTNBによるSH基の定量で確認した.^<15>Nラベルしたp67^<phox>蛋白質のSH3ドメインを調製した.p67^<phox>SH3はシステイン残基をセリンに変えた変異体であるが,これはリガンドが結合していない状態ではアンフォールドしているが,リガンドが結合するとフォールドする性質をもっている.4種のペプチドのうち1つがSH3ドメインをフォールドさせることができた.このペプチドはSS結合でコンホメーションが制限されているので,通常のポリプロリンヘリックス2型のコンホメーションで結合しているとは考えにくい.NMR測定をおこなって構造情報を収集した.

SH3-D configuration is combined with PXXP configuration. The market is full of Ph.D.- C7C protein is used in the production of GST fusion protein in Escherichia coli (BioLabs)<phox><phox>.Glutathione coated96-hole HS plate is used in the production of GST fusion protein in Escherichia coli (BioLabs). Also, the selection process in the solution is carried out using GST Magnet Agarose Beads. Specific absorption, dissolution, coliform infection, and recovery 3 Responses to "Return" The results were confirmed by ELISA.ファージライブラリPh.D.- C7C is a complex of 7 residues, and SS binding is formed by cyclization.PXXP is a complex of 7 residues, and SS binding is formed by cyclization. 4. The synthesis of SS and SS was carried out in the presence of acid. Mass analysis and quantitative confirmation of SH groups.^ <15>The <phox>SH3-terminal of N protein was modulated by p67 ^ SH3-terminal residues. The SH3<phox>-terminal residues were changed into different forms. The state of the SH3-terminal residues was changed into different forms. The properties of the SH3-terminal residues were changed into different forms. The SH3-terminal residues were changed into different forms. The SH3-terminal residues were changed into different forms. The SH3-terminal residues were changed into different forms. The structural information of the complex is collected by NMR measurements.