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肝細胞期熱帯熱マラリア原虫の培養系の確立

恶性疟原虫肝细胞期培养体系的建立

基本信息

批准号：
16659112
负责人：
鳥居本美
金额：
$ 2.11万
依托单位：
Ehime University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至 2005
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究では、肝細胞期熱帯熱マラリア原虫で発現量の多い遺伝子産物のプロモーター領域を用いて緑色蛍光タンパク質(GFP)で標識した熱帯熱マラリア原虫を作成し、肝細胞期原虫の簡便な検出方法を構築することを最初の目的とし、さらに、この方法を用いてマラリア原虫の肝細胞への感染率の定量化を行うとともに、感染効率のよい培養条件を検討することで、未確立の肝細胞期熱帯熱マラリア原虫の培養系の確立を目指した。初年度は、肝細胞に感染するスポロゾイト期を形成することを実験的に確認した2種類の熱帯熱マラリア原虫株に対して遺伝子導入を行い、Elongation Factor 1(EF1)のプロモーターからGFPおよびLuciferaseを発現しているGFP安定発現熱帯熱マラリア原虫およびLuciferase安定発現熱帯熱マラリア原虫を作成し、これらのマラリア原虫が、赤血球期においてもGFPおよびLuciferaseを発現していることを確認した。昨年度は、これらのGFP安定発現熱帯熱マラリア原虫ゲノムへの発現カセットの組み込みを図ったが、6ヶ月以上にわたり培養を継続しているにもかかわらず、現在のところ、組み込みはみられない。そこで、最近、新しく開発されたpiggyBacトランスポゾンの原理を利用した迅速にゲノムへの組み込みができる遺伝子導入法に方法を変更し、あらたにプラスミドを構築し2種類の熱帯熱マラリア原虫に遺伝子導入を行った。さらにEF1に加え、肝細胞期原虫に発現するHeat Shock ProteinのプロモーターからGFPおよびLuciferaseを発現するコンストラクトを新たに作成した。これらのコンストラクトの薬剤選択マーカーは、最終的に薬剤スクリーニングにも使用することを考慮して、最初のコンストラクト(human DHFR)とは異なるもの(BSD)を用いている。

In this study, we used green fluorescent protein (GFP) as marker to construct a simple method for detecting hepatocellular parasites. The method was used to quantify the infection rate of hepatocellular parasites. The infection rate and culture conditions were discussed, and the establishment of culture lines for unestablished hepatocytes was indicated. In the early years, the development of hepatocyte infection was confirmed. Two types of hot spots were identified. Elongation Factor 1(EF1) was identified. GFP and Luciferase were detected. GFP and Luciferase were detected. Red blood cells, GFP, Luciferase. In the past year, the GFP stability has been improved, and the development of the GFP has been improved. Recently, a new development has been made to utilize the principle of the piggyBac Transcription Support to quickly change the method of gene introduction, and to build two types of hot zone malaria parasites for gene introduction. In addition to EF1, the development of HeatShock Protein is a new development of GFP and Luciferase. This is the first time that a person has ever used a computer, such as a computer, or a computer.

项目成果

期刊论文数量（18）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

Nasal immunization with a malaria transmission-blocking vaccine candidate Pfs25 induces complete protective immunity in mice against field-isolated Plasmodium falciparum

使用阻断疟疾传播的候选疫苗 Pfs25 进行鼻免疫可诱导小鼠针对现场隔离的恶性疟原虫产生完全保护性免疫力

DOI：
发表时间：
2005
期刊：
Infection and Immunity 73
影响因子：
0
作者：
Arakawa T;et. al.
通讯作者：
et. al.

Antibodies against MAEBL ligand domains M1 and M2 inhibit sporozoite development in vitro

DOI：
10.1128/iai.72.6.3604-3608.2004
发表时间：
2004-06-01
期刊：
INFECTION AND IMMUNITY
影响因子：
3.1
作者：
Preiser, P;Rénia, L;Adams, JH
通讯作者：
Adams, JH

2-Cys peroxiredoxin TPx-1 is involved in gametocyte development in Plasmodium berghei

DOI：
10.1016/j.molbiopara.2006.02.018
发表时间：
2006-07-01
期刊：
MOLECULAR AND BIOCHEMICAL PARASITOLOGY
影响因子：
1.5
作者：
Yano, Kazuhiko;Komaki-Yasuda, Kanako;Kawazu, Shin-ichiro
通讯作者：
Kawazu, Shin-ichiro

SURFIN is a polymorphic antigen expressed on Plasmodium falciparum merozoites and infected erythrocytes.

Surfin是一种在恶性疟原虫植物和感染的红细胞上表达的多态性抗原。

DOI：
10.1084/jem.20041392
发表时间：
2005-06-06
期刊：
JOURNAL OF EXPERIMENTAL MEDICINE
影响因子：
15.3
作者：
Winter, G;Kawai, S;Haeggström, M;Kaneko, O;von Euler, A;Kawazu, SI;Palm, D;Fernandez, V;Wahlgren, M
通讯作者：
Wahlgren, M

Erythrocyte surface glycosylphosphatidyl inositol anchored receptor for the malaria parasite