RNAi技術を駆使したテロメレース制御と婦人科癌の遺伝子治療への応用

RNAi技术端粒酶调控及其在妇科肿瘤基因治疗中的应用

基本信息

批准号：
16659447
负责人：
京哲
金额：
$ 2.05万
依托单位：
Kanazawa University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至 2006
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-16659447/
关键词：
telomerase hTERT RNAi RNA interferance telomere siRNA gene therapy cervical cancer

项目摘要

テロメレースはテロメア伸長酵素であり、その活性化は細胞分裂ごとのテロメア短縮を防ぎ、細胞に不死化能を賦与する。テロメレースの活性化はあらゆる癌種に認められる現象であり、癌の分子標的治療のターゲットとなり得る。本研究ではテロメレースを構成する触媒サブユニットであるhTERT (human telomerase reverse transcriptase)をターゲットとして、この遺伝子の発現をRNA interferenceにより抑制し、テロメレース阻害による婦人科癌の遺伝子治療を試みた。我々はHarvard Medical Schoolとの共同によりhTERT遺伝子発現を効率的に抑制するsiRNA配列を見いだし、これらをretrovirusの系で子宮頚癌細胞(HeLaおよびSiHa細胞)に導入してテロメレース活性の変化および細胞増殖に与える影響を詳細に観察した。siRNA導入により子宮頚癌細胞のテロメレース活性およびhTERTmRNA発現は著明に低下した。これらの細胞はPD40-50で老化を起こし、増殖を停止した。軟寒天培地でのコロニー形成およびマウスでの造腫瘍実験では。siRNA導入で著明な発育抑制が認められ、抗腫瘍効果が明らかとなった。以上よりhTERTをターゲットとしたsiRNAテクノロジーで癌の増殖をコントロールできることがわかり、今後の臨床応用に向けてさらに研究を継続させる予定である。

端粒酶是一种端粒延伸酶，其活化可防止细胞分裂过程中的端粒缩短，并使细胞具有永生。端粒酶的激活是在所有癌症类型中都看到的一种现象，可以成为分子靶向癌症的靶标。在这项研究中，我们靶向HTERT（人端粒酶逆转录酶），这是一种构成端粒酶的催化亚基，并通过RNA干扰抑制了该基因的表达，并尝试通过抑制端粒酶对妇科癌症进行基因治疗。我们与哈佛医学院合作，发现了有效抑制HTERT基因表达的siRNA序列，并将其引入逆转录病毒系统中的宫颈癌细胞（HELA和SIHA细胞）中，以密切观察端粒酶活性的变化及其对细胞增殖的影响。 siRNA转移可显着降低宫颈癌细胞中的端粒酶活性和HTERT mRNA的表达。这些细胞以PD40-50渗透并停止增殖。在软琼脂培养基中的菌落形成和小鼠肿瘤形成实验。 siRNA的引入显示出明显的生长抑制作用，揭示了抗肿瘤作用。从上面可以清楚地看出，针对HTERT的siRNA技术可以控制癌症的生长，并计划进一步研究以继续进行未来的临床应用。