再生骨および歯と受容者(recipient)組織間の特異的相互作用の解析

1. In vitroにおける歯の再生研究胎生13日マウス歯胚を取り出し、コラゲナーゼにより上皮と間葉を分離後、single-cell suspensionを作製し、再構築して培養を行った。しかしながら、歯胚の発育は認められず、分離方法および培養条件などの検討が必要であると思われた。2. In vivoにおける硬組織再生とrecipientとの相互作用歯髄の硬組織形成機構に関する研究6週齢雄性Wistar系ラットの下顎切歯固有歯髄を分離し、同系ラットの頭部皮下に他家移植した。移植3、7、14日後に移植片を周囲組織とともに取り出し固定、脱灰後パラフィンに包埋し、オステオカルシン(OCN)、オステオポンチン(OPN)、骨シアロタンパク(BSP)、象牙質シアロタンパク(DSP)及び組織非特異的アルカリホスファターゼ(TNAP)の局在を、免疫組織化学的に検索した移植3日後、歯髄組織辺縁部では典型的な象牙芽細胞は消失したが、歯髄全体に強い変性は見られなかった。7日後、歯髄組織辺縁より内側に向かって細胞を封入した硬組織が形成され、この硬組織の内側表面には卵円形の細胞が観察された。14日後、硬組織形成はさらに進み、移植歯髄のほぼ全体に石灰化が認められた。新生硬組織及びその周囲の細胞は、OCN、OPN及びBSP陽性反応を示したが、DSPについては陰性であった。TNAPは3日後では歯髄組織辺縁部で局在を示し、7日以降は硬組織の内側表面で強い局在が認められた。さらに、GFP発現ラットを用いた歯髄移植実験から、硬組織形成細胞は歯髄細胞由来であることが明らかとなった。したがって、歯髄は歯の環境を離れた後も硬組織誘導能を有し、骨様組織形成を行ったことから、歯の硬組織再生における歯髄の有用性が示唆された。

1. In vitroにおける歯の再生研究胎生13日マウス歯胚を取り出し、コラゲナーゼにより上皮と間葉を分離後、single-cell suspensionを作製し、再構築して培養を行った。しかしながら、歯胚の発育は認められず、分離方法および培養条件などの検討が必要であると思われた。2. In vivoにおける硬組織再生とrecipientとの相互作用歯髄の硬組織形成機構に関する研究6週齢雄性Wistar系ラットの下顎切歯固有歯髄を分離し、同系ラットの頭部皮下に他家移植した。移植3、7、14日後に移植片を周囲組織とともに取り出し固定、脱灰後パラフィンに包埋し、オステオカルシン(OCN)、オステオポンチン(OPN)、骨シアロタンパク(BSP)、象牙質シアロタンパク(DSP)及び組織非特異的アルカリホスファターゼ(TNAP)の局在を、免疫組織化学的に検索した移植3日後、歯髄組織辺縁部では典型的な象牙芽細胞は消失したが、歯髄全体に強い変性は見られなかった。7日後、歯髄組織辺縁より内側に向かって細胞を封入した硬組織が形成され、この硬組織の内側表面には卵円形の細胞が観察された。14日後、硬組織形成はさらに進み、移植歯髄のほぼ全体に石灰化が認められた。新生硬組織及びその周囲の細胞は、OCN、OPN及びBSP陽性反応を示したが、DSPについては陰性であった。TNAPは3日後では歯髄組織辺縁部で局在を示し、7日以降は硬組織の内側表面で強い局在が認められた。さらに、GFP発現ラットを用いた歯髄移植実験から、硬組織形成細胞は歯髄細胞由来であることが明らかとなった。したがって、歯髄は歯の環境を離れた後も硬組織誘導能を有し、骨様組織形成を行ったことから、歯の硬組織再生における歯髄の有用性が示唆された。