エネルギー損失分光電子顕微鏡を用いた組織細胞化学による石灰化研究の新しい展開

使用能量损失光谱电子显微镜进行组织细胞化学钙化研究的新进展

• 批准号: 10877289
• 负责人: 小澤 英浩
• 金额: $ 1.09万
• 依托单位: Niigata University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10877289/
• 关键词: 骨; 石灰化; 微細形態; 組織細胞化学; 元素分析; エネルギーフィルター透過型電子顕微鏡; 電子エネルギー損失分光電子顕微鏡; エネルギー損失分光電子顕微鏡; 生物学的石灰化; 骨基質; プロテオグリカン; アルカリフォスファターゼ; デコリン; コラーゲン細線維; 基質小胞

本年度は、電子エネルギー損失分光電子顕微鏡(EELS)の運用に改良を加え、今までなし得なかったÅレベルの元素の局在解析法と高分解免疫電顕法を開発し、生物学的石灰化におけるコラーゲン性石灰化の機序を解明することを目的として、EELSとイメージングプレートとを組み合わせた分析電顕システムを用いてコラーゲン性石灰化機構を解析した。実験試料には、胎生期ラット頭頂骨を液体ヘリウムで急速凍結し、さらに凍結置換を行ったものを用いた。この試料を超薄切して、EELSで観察し、微細形態の検索や、元素分析、オステオネクチンの免疫電顕等を行った。胎生期頭蓋骨では、基質小胞内での結晶析出から、石灰化の形成、コラーゲン性石灰化による広範な石灰化基質の確立にいたる一連の過程が観察できる。石灰化球では石灰化結晶の集積が観察されるが、結晶表面には、酢酸ウラン・クエン酸鉛の電子染色で染色される幅約1nmの結晶鞘が存在しており、その部位には、Nの明らかな集積は見られなかったことから、結晶鞘は比蛋白性成分から構成されていることが示唆された。このように、免疫電顕では物質の局在同定は困難である微細な構造においても、この電顕を用いた分析では、組成に関する情報がえられることが明らかとなった。さらに、この電顕を用いた高分解能免疫電顕では、石灰化球とコラーゲン細線維の境界部にオステオネクチンが集積することが明らかとなり、オステオネクチンがコラーゲン性石灰化に重要な役割を果たすことが示唆された。

This year は, electronic エ ネ ル ギ ー loss (EELS) spectral electronic 顕 micro mirror の using modified を に え, today ま で な し have な か っ た A レ ベ ル の elements の bureau in analytic method と high decomposition immune 顕 method を open 発 し calcification, biology に お け る コ ラ ー ゲ ン sex calcification の machine sequence を interpret す る こ と を purpose と し て, EELS と イ メ ー ジ ン グ プ レ ー ト と を group み close わ せ た analysis electric 顕 シ ス テ ム を with い て コ ラ ー ゲ ン sex calcification institutions を parsing し た. Be 験 sample に は, TaiShengQi ラ ッ ト parietal を liquid ヘ リ ウ ム で quick freezing し, さ ら に frozen line displacement を っ た も の を with い た. こ の sample を ultra-thin cutting し て, EELS で 観 し, micro morphology の 検 cable や, elemental analysis, オ ス テ オ ネ ク チ ン の immune を line, such as electric 顕 っ た. TaiShengQi skull で は, small matrix intracellular で の crystallization precipitation か ら, lime の formation, コ ラ ー ゲ ン sex calcification に よ る hiroo van な calcification matrix の establish に い た る process for の が 観 examine で き る. Calcification ball で は calcification crystallization の set product が 観 examine さ れ る が, crystal surface に は, boggy acid ウ ラ ン · ク エ ン acid lead の electronic dyeing で さ れ る about 1 nm の crystal sheath が exist し て お り, そ の parts に は, N の Ming ら か な set product は see ら れ な か っ た こ と か ら, crystal sheath は than protein composition か ら constitute さ れ て い る こ と が in business Youdaoplaceholder0. こ の よ う に, immune electric 顕 で は material の bureau in difficulty with fixed は で あ る imperceptible な tectonic に お い て も, こ の electric 顕 を with い た analysis で は, composition に masato す る intelligence が え ら れ る こ と が Ming ら か と な っ た. さ ら に, こ の electric 顕 を with い た high decomposition can immune electric 顕 で は, lime ball と コ ラ ー ゲ ン thin line d の state department に オ ス テ オ ネ ク チ ン が set product す る こ と が Ming ら か と な り, オ ス テ オ ネ ク チ ン が コ ラ ー ゲ ン sex calcification に important な "を cut fruit た す こ と が in stopping さ れ た.

项目成果

Hoshi,K.: "Morphological characterization of skeletal cells in cbfa1-deficient mice"Bone. 25・6. 639-651 (1999)

Hoshi, K.：“cbfa1 缺陷型小鼠骨骼细胞的形态学特征”Bone. 639-651 (1999)。

小澤英浩: "骨・基礎講座 1.骨のリモデリングのメカニズム" クインテッセンス・デンタル・インプラントロジー. 5・1. 73-75 (1998)

小泽秀宏：“骨/基础课程 1. 骨重塑机制”Quintessence Dental Implantology 5・1（1998）。

小澤英浩: "骨・基礎講座 6.骨の細胞たち-IV" クインテッセンス・デンタル・インプラントロジー. 5・6. 62-69 (1998)

小泽秀宏：“骨/基础课程 6. 骨细胞-IV”精华牙科种植学 5・6（1998 年）。

平賀 徹 他: "癌の骨転移の微細形態" 腎と骨代謝. 12・1. 15-21 (1999)

Toru Hiraga 等：“癌症骨转移的微观形态”肾和骨代谢 12・1（1999）。

Mizuno, A.他: "Swvere osteoporosis in mice lacking OCIF/OPG(Osteoclastogenesis inhibitory factor/Osteoprotegerin)." Biochemical and Biophysical Research Communications. 247. 610-615 (1998)

Mizuno, A. 等人：“缺乏 OCIF/OPG（破骨细胞生成抑制因子/骨保护素）的小鼠中的 Swvere 骨质疏松症。生物化学和生物物理研究通讯。”247. 610-615 (1998)