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逆行性シナプス間トレーサー蛍光タンパクの開発

逆行突触间示踪荧光蛋白的开发

基本信息

批准号：
17650094
负责人：
横井峰人
金额：
$ 2.18万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至 2006
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-17650094/
关键词：
脳遺伝子マウス遺伝学トレーサーシナプス蛍光タンパク

项目摘要

脳機能の解析には、基盤となる解剖学的知見が不可欠である。GFPの発見以来、個々の神経細胞を樹状突起、細胞体から軸索を可視化する蛍光タンパクは多く開発され、脳機能解析の推進に大きく貢献している。さらに、個々の神経細胞にとどまらず、シナプスでつながる神経細胞を可視することができれば、機能的神経回路を明らかにすることとなり、脳機能解析の推進への貢献はきわめて大きなものと期待される。しかしながら、十分な感度とシナプス特異性を示すシナプス間トレーサーは未だに開発されていない。本研究では、十分な感度とシナプス特異性を示す逆行性シナプス間トレーサー蛍光タンパクの開発を目的とする。逆行性シナプス間トレーサータンパクとして機能するためには、発現細胞内において細胞体から樹状突起上のシナプス後膜へと運ばれ、そこで分泌され、シナプス前細胞の軸索終末から取り込まれ、軸索から樹状突起へ運ばれる性質を備えている必要がある。申請者は、テタヌストキシンCフラグメント(TTC)が毒性を持たずシナプス前膜から取り込まれ、逆行性に運ばれる性質を持つことに注目した。可視化のため広いpHレンジで安定な蛍光タンパクであるビーナスタンパク(Venus)をTTCに融合した(Venus-TTC)。このコンストラクトVenus-TTCを線条体投射神経細胞において選択的に発現させるべくトランスジェニックマウスの作成を試みた。しかしながら、トランスジーンが十分量発現するマウスラインが得られなかった。しかしながら、アルカリフォスファターゼをTTCにつないだAPTTCは、シナプス間逆行性トレーサーとして機能することを線条体神経回路において明らかにし、論文として報告し、ジャーナルのカバーピクチャーに採用された(Sano et al., Genesis(2007))。

The analysis of function and anatomy is indispensable. Since the discovery of GFP, each neuron has contributed greatly to the development of dendrites and axons, and to the advancement of functional analysis In addition, the function of the neuron is analyzed and the contribution of the neuron is expected. The sensitivity and specificity of the sample are shown in the following table. The purpose of this study is to demonstrate the sensitivity and specificity of the ten points. Retrograde axonal end-to-end axonal end-to-end axonal end-to-dendritic end-to-dendritic axonal end-to-dendritic end-to-dendritic The applicant shall pay attention to the nature of toxicity and retrograde transport before the application. Visualize the pH of the solution and stabilize the solution by adding the Venus-TTC. The development of this Venus-TTC linear projection neuron selection has been attempted for six months. The first time I saw it, I saw it in ten minutes. In addition to the above, it is also possible to use APTTC, which is a retrograde property of linear neurologic circuits.(Sano et al., Genesis(2007))。