中性子散乱によるリポソーム間の脂質交換反応の速度論的解析

使用中子散射对脂质体之间的脂质交换反应进行动力学分析

基本信息

批准号：
17655005
负责人：
中野実
金额：
$ 1.86万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至 2006
项目状态：
已结题

项目摘要

リン脂質dimyristoylphosphatidylcholine (DMPC)からなる一枚膜ベシクル(LUV)および両親媒性ペプチド18AとDNPCとのディスク状複合体について、H体、D体それぞれのDMPCを用いて調製し、D_2O/H_2O=1:1の緩衝液中で中性子小角散乱測定を行った。まず、D体LUVとH体LUVがほぼ等しい散乱強度プロファイルを示すこと、D体とH体をそれぞれ50%含むLUVからはほとんど散乱が観測されないことを確認した。次に、D体LUVとH体LUVを1:1で混合し、その後の散乱強度を時分割測定で評価した。その結果、散乱強度は時間とともに減衰し、温度の上昇とともに、減衰速度が速まることが判明した。また、この減衰挙動はDouble-exponential関数でフィットできたことから、強度減衰には2つのモードが寄与していることが示唆された。これらは、脂質が粒子間を移動するモードと、粒子内で脂質二重層の表と裏を移動するフリップフロップに起因すると考えられ、37℃におけるそれぞれの半減期が約150分、510分と求められた。一方、ディスク状複合体については、H体ディスク、D体ディスクを1:1で混合すると直ちに強度減少が終了し、粒子間の脂質混合が観測の時間スケールよりも早いことが判明した。この結果は、ディスク同士の融合を示唆している。蛍光エネルギー移動を利用した実験においても非常に速い、かつ濃度依存的な蛍光脂質の移動が観察されたことから、ディスク間で速い融合、解離が起こっていることが明らかとなった。

单个膜囊泡（LUV）的圆盘状复合物，该膜囊泡（LUV）由磷脂型dimyristoylphospadadylcholine（DMPC）和两亲性肽18A和DNPC组成，并使用DMPC用于H和D形式的DMPC和DMPC进行H和D形式，以及中子的小角度散射测量测量= 1________________________________________________________________2。首先，已经证实D-Form LUV和H形LUV表现出大致相等的散射强度曲线，并且几乎没有从含有50％D-Form和H形式的LUV中观察到散射。接下来，在1：1时混合了D-Form Luv和H形LUV，并通过时间划分测量评估散射强度。结果，发现散射强度会随着时间的推移而衰减，并且衰减速度随温度的升高而增加。此外，这种阻尼行为具有双指数函数，这表明两种模式有助于强度阻尼。被认为归因于脂质在颗粒和触发器之间移动的模式，在颗粒内移动脂质双层的前后，并且在37°C处的半衰期确定为大约150分钟510分钟。另一方面，对于类似磁盘的复合物，当H型磁盘和D型磁盘在1：1时混合时，将立即完成强度降低，并且发现颗粒之间的脂质混合比观察到的时间尺度快。该结果表明圆盘的融合。在利用荧光能传递的实验中，还观察到非常快速和浓度依赖性荧光脂质的转移，很明显，盘之间发生快速融合和分离。