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ブロムグラス培養細胞が分泌する不凍タンパク質の同定

培养的雀麦细胞分泌的抗冻蛋白的鉴定

基本信息

批准号：
17658011
负责人：
石川雅也
金额：
$ 1.86万
依托单位：
National Institute of Agrobiological Sciences
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至 2006
项目状态：
已结题

项目摘要

越冬性作物では、低温馴化して耐凍性を獲得する。この耐越冬性や耐凍性機構の一つとして、細胞間隙に出現する不凍活性物質があり、氷晶成長や再結晶による氷肥大化を抑制して組織細胞を機械的損傷から保護していると考えられる。しかし、不凍活性物質は組織に少量しか含まれず、真の活性物質を同定するには、大量に活性画分を得ることが重要である。また、Griffithらによりイネ科植物の不凍活性の本体とされていた低温誘導性分泌型キチナーゼは、不凍活性がないことが研究担当者の形質転換植物の解析により判明した(Nakamura, et. al. 2007)。高耐寒性イネ科牧草、ブロムグラスの懸濁培養細胞の培地中には、低温処理により不凍活性が出現する。本研究では、この系を用いて真の不凍活性物質を同定することを目的とする。昨年度の結果から本不凍活性は熱耐性タンパク質と考えられ、本年度は、確立した手法により不凍活性物質の大量精製を行った。精製物の電気泳動を行い、目的タンパク質のバンド同定とESI-MSMSによる部分アミノ酸配列の同定を試みた。また、本活性の特徴を更に解析した。1)本不凍活性出現に対する植物ホルモンの効果を調べた。ABA処理、MeJA、キチン処理等では活性が出現しなかった。エチレン処理により活性が出現した。不凍活性の有機溶媒耐性や各種レクチン処理の効果を調べた。殆どのレクチンは不凍活性を阻害しなかった。10%を超える有機溶媒では阻害されることが多いが、アセトニトリルには耐性が高い。2)ブロムグラス細胞の低温下大量培養により、30L以上の培地を得て、これらを濃縮した。3)4本のカラムにより、精製を進めた。4)精製物の電気泳動を行い、候補のタンパク質のバンド数本が判明した。これらについて、ESI-MSMSによりアミノ酸部分配列を決定中である。本研究は補欠採用で17年度途中から開始され、培養細胞の不具合等で研究進捗が予定より遅れているが、不凍タンパク質の同定まで一歩手前である。他予算で何とか遺伝子単離まで進捗させる予定である。

Overwintering crops, low temperature, low temperature and low temperature. The mechanism of tolerance to overwintering is very important, and the cell gap shows that there is no significant change in the growth of active substances, growth and growth, and then the inhibition of tissue cell hypertrophy. The protection of tissue cell machinery has been tested. A small amount of Lactobacillus, a small amount of bioactive substances, a large number of bioactive substances, and a large number of active substances were detected in the tissue samples. In this paper, the authors of the study on the plants of the family Lepidopterygidae, Griffith and Griffith, are responsible for the study of plant morphology, plant analysis, identification and identification (Nakamura, et). Al. 2007). The herbage with high cold tolerance was found to be active at low temperature, medium temperature, low temperature and low temperature. In this study, the purpose of this study was to determine the content of bioactive substances in the system. The results of last year showed that the active drug tolerance test was conducted in this year, and this year, make sure that there is a high concentration of active substances. The precision electrophoretic swimming exercise is the same as that of the ESI-MSMS electrophoretic exercise. This activity is more important to analyze the situation. The main results are as follows: 1) this activity shows that there is no significant difference between the plant and the plant. The activity of ABA, MeJA, and so on, was found to be positive. Please tell me that the activity has been detected. Non-active organic solvent tolerance is used to evaluate the effects of various kinds of organic solvents on the results. Almost all of them are not active enough to block the damage. 10% of the super-machine-owned solvents are resistant to multi-drug, and the tolerance is very high. 2) the cells were cultured in large quantities at low temperature, above 30L, and at low temperature. 3) 4. This book is designed to improve the quality and quality of the program. 4) the precision products, swimming exercises, waiting tables, waiting tables, training, swimming, swimming Please tell me that the acid part of the ESI-MSMS is in the process of being determined. In this study, we did some research, such as the beginning of the first year of employment, the beginning of the training program, and so on. In this study, we did a lot of research in this study, such as the beginning of the 17-year program, the training program, and so on. He calculated that he would like to know how much he would like to do so.