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イネの胚・胚乳特異的なDNAメチル化およびゲノムインプリンティングに関する研究

水稻胚/胚乳特异性DNA甲基化及基因组印记研究

基本信息

批准号：
17658004
负责人：
中園幹生
金额：
$ 2.24万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至 2006
项目状态：
已结题

项目摘要

植物が有性生殖を行う際、特定の遺伝子が父親由来か母親由来かにより、その発現が異なる現象が知られており、ゲノムインプリンティングとよばれている。しかし、現在のところ植物でインプリンティングされることが明らかになっている遺伝子数が少ないため、ゲノムインプリンティングの意義について十分に理解されていない。シロイヌナズナの胚乳発生過程では、インプリンティングを受けるいくつかの遺伝子が胚乳の発達に重要准機能を果たし、そのゲノムインプリンティングの制御にDNAメチル化が関与していることが示唆されている。そこで本研究では、モデル植物でかつ重要な作物であるイネを用いて、胚発生および胚乳発生過程でインプリンティングされる遺伝子を同定し、ゲノムインプリンティングの機構や意義について理解を深める。さらに、ゲノムインプリジティングを受ける遺伝子がイネの胚・胚乳の発達にどのように関与するかについても調査する。平成18年度は、受精後10日目のイネの穎花を単離・固定し、パラフィン包埋切片を調製した。切片厚10〜20μmの切片をLeica社のLMD装置にセットし、胚と胚乳をそれぞれ単離した。それぞれDNAを抽出し、数十から数百マイクログラムの全DNAを回収できた。さらにBisulfite法によりメチル化されていないシトシン残基をウラシルに変換させることによって、メチル化DNA領域と非メチル化DNA領域を区別できた。平成18年度内にゲノムインプリンティングされる遺伝子の同定までは至らなかったが、本研究により、微細な組織よりLMDによりDNAを抽出し、メチル化DNA領域の同定・解析が可能であることを証明できたことは意義深いと考えられる。

The phenomenon of plant sexual reproduction, specific inheritance, paternal origin, maternal origin, and emergence is known as "sexual reproduction." The number of seeds in the plant is small, and the meaning of the plant is well understood. The development of endosperm is a process that involves the development of DNA and the regulation of endosperm development. This study is aimed at understanding the mechanism of plant development and its significance in the development of important crops, embryos and endosperm. In addition, it is necessary to investigate the relationship between embryo development and endosperm development. In the 18th year of Heisei, 10 days after fertilization, the spikelets were separated, fixed, embedded and prepared. Slice thickness of 10 ~ 20μm was measured by Leica's LMD system. All DNA was extracted, tens of thousands of pieces of DNA were extracted, and all DNA was recovered. The Bisulfid method is used to distinguish between undifferentiated and differentiated DNA domains. In the 18th year of Heisei, the identification of DNA in micro-tissues was extracted and analyzed.