Single Cell Oilの新展開「機能性脂肪酸から構造脂質・機能性脂質へ」

近年、ジアシルグリセロール(DG)は、その特異な栄養機能から新規機能性脂質として注目を集めている。そこで、高度不飽和脂肪酸含有トリアシルグリセロール(TG)を高生産する油糧微生物Mortierella alpina 1S-4株からジアシルグリセロールを特異的に蓄積する変異株の取得を試みた。野生株1S-4に変異処理を施した菌体からBligh-Dyer法により脂質を抽出した後、薄層クロマトグラフィー(TLC)と高速液体クロマトグラフィー(HPLC)で分析するという2段階のスクリーニングを行った。その結果、脂質中のTGの割合が少なく、DGの含有量が高い変異株(KY1株)を取得した。2%グルコース、1%酵母エキスの液体培地にて、28℃、8日間培養して得られた変異株と親株1S-4について、TLCにてTG、DG、遊離脂肪酸、極性脂質(PL)を分画し、経時的に定量分析したところ、培養6日目にKY1株ではDG量が乾燥菌体1gあたり8.8mgに達し、同じ培養日数における親株のDG量(1.1mg/g乾燥菌体)を大きく上回った。また、PLも親株より多くなっており、親株の総脂質中のPL含有率は10%以下であるのに対し、KY1株においては培養8日目にPLが総脂質の35%に達した。なお、各脂質成分中の脂肪酸組成を分析したところ、親株とKY1株の間に大きな違いは見られなかった。KY1株は高度不飽和脂肪酸含有率の高いDGの生産に適した変異株であると考えられた。TGのacidolysisならびにglyceride synthesisによるグリセロールへの特異的脂肪酸の導入に有用なリパーゼの探索を行った結果、Pseudomonas fluoresoens HU380株、ならびに、P.flucresoens AK102株にユニークな脂肪酸特異性を示すリパーゼを見いだした。

近年、ジアシルグリセロール(DG)は、その特異な栄養機能から新規機能性脂質として注目を集めている。そこで、高度不飽和脂肪酸含有トリアシルグリセロール(TG)を高生産する油糧微生物Mortierella alpina 1S-4株からジアシルグリセロールを特異的に蓄積する変異株の取得を試みた。野生株1S-4に変異処理を施した菌体からBligh-Dyer法により脂質を抽出した後、薄層クロマトグラフィー(TLC)と高速液体クロマトグラフィー(HPLC)で分析するという2段階のスクリーニングを行った。その結果、脂質中のTGの割合が少なく、DGの含有量が高い変異株(KY1株)を取得した。2%グルコース、1%酵母エキスの液体培地にて、28℃、8日間培養して得られた変異株と親株1S-4について、TLCにてTG、DG、遊離脂肪酸、極性脂質(PL)を分画し、経時的に定量分析したところ、培養6日目にKY1株ではDG量が乾燥菌体1gあたり8.8mgに達し、同じ培養日数における親株のDG量(1.1mg/g乾燥菌体)を大きく上回った。また、PLも親株より多くなっており、親株の総脂質中のPL含有率は10%以下であるのに対し、KY1株においては培養8日目にPLが総脂質の35%に達した。なお、各脂質成分中の脂肪酸組成を分析したところ、親株とKY1株の間に大きな違いは見られなかった。KY1株は高度不飽和脂肪酸含有率の高いDGの生産に適した変異株であると考えられた。TGのacidolysisならびにglyceride synthesisによるグリセロールへの特異的脂肪酸の導入に有用なリパーゼの探索を行った結果、Pseudomonas fluoresoens HU380株、ならびに、P.flucresoens AK102株にユニークな脂肪酸特異性を示すリパーゼを見いだした。