インドール酢酸生合成酵素の分子機能解析

吲哚乙酸生物合成酶的分子功能分析

• 批准号: 09876025
• 负责人: 清水 昌
• 金额: $ 1.47万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 1998
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-09876025/
• 关键词: インドール酢酸; ニトリラーゼ; Alcaligenes faecalis; インドールアセトニトリル; キメラ酵素; Rhodococcus rhodochrous

Alcaligenes faccalisのインドール酢酸(IAA)合成に関わる(インドールアセトニトリルからLAAへの加水分解反応を触媒する酵素)ニトリラーゼの発現調節機構を解析した。既にクローン化している本菌のニトリラーゼ遺伝子nitAを含む種々のデリーションクローンのニトリラーゼ活性を測定した結果、nitAの上流約0.3kb、下流約1.5kbの領域がイソバレロニトリルによるニトリラーゼの誘導発現に必要であることが判明した。本領域には、一つのORF(nitR)が存在し、nitRから予想されるアミノ酸配列は、Pseudomonas putidaのキシレン代謝系遺伝子の誘導発現を正に調節するXylSおよび大腸菌のアラビノース代謝系遺伝子の誘導発現を調節するAraCと、特にタンパク質のC末端部分において相同性を示した。XylSやAraCは相同性のあまり高くないN末端部分でそれぞれのインデューサーとなる化合物を認識し、相同性の高いC末端部分に存在するhelix-turn-helixモチーフの領域で特定のDNA配列と結合して、転写を調節すると考えられている。一方、nitAをlacプロモーターの下流に連結し大腸菌で発現させた場合、nitRが存在しなくてもIPTGによりニトリラーゼが活性の有る状態で大量に発現したことから、上記の結果も考え併せると、NitRタンパク質はnitAの発現を転写レベルで正に調節するタンパク質であることが示唆された。このように、ニトリラーゼの発現調節機構モデルを提示することができた。

Alcaligenes faccalis sulfuric acid (IAA) was synthesized and characterized by the analysis of the mechanism of the decomposition of reverse catalytic enzyme (enzyme) by adding water to decompose the catalyst enzyme in water. The results of the determination of the activity of nitA, the upstream of nitA, the upstream of 1.5kb, and the downstream of 1.5kb, were not only detected in the field of bacteria, but also in the field of 1.5kb. In this field, ORF (nitR) devices exist, Pseudomonas putida devices are expected to be used in acid configuration, and Pseudomonas putida devices are used in the system to show that they are the same as those at the end of the C-terminal. XylS, AraC, homology, N-terminal, C-terminal One party, nitA, IPTG, nitR, IPTG, and so on. On the other hand, there are a large number of health problems in one party, such as one party, one, one, two, one, one, two, one, two, one, one, Please tell me that the organization will tell you that it is necessary to send a message to you.

项目成果

小林 達彦: "Rhodococcusのニトリルヒドラターゼとトランスポーター" 日本応用酵素協会誌. 32. 1-7 (1997)

小林达彦：“红球菌的腈水合酶和转运蛋白”日本应用酶协会杂志 32. 1-7 (1997)。

清水 昌: "高純度化技術大系、第3巻" フジ・テクノシステム,東京, 11 (1997)

Masaru Shimizu：“高净化技术系统，第 3 卷”Fuji Techno System，东京，11 (1997)

小林 達彦: "ニトリル変換酵素の物質生産への機能開発" 農化誌. 71(12). 1243-1252 (1997)

小林达彦：“用于材料生产的腈转化酶的功能开发”Nouka-shi 71(12)(1997)。

Kobayashi,M.et al.: "The catalytic mechanism of amidase also involves nitrile hydrolysis" FEBS Lett.439. 325-328 (1998)

Kobayashi,M.et al.：“酰胺酶的催化机制还涉及腈水解”FEBS Lett.439。