渦鞭毛藻の麻痺性貝素性合成遺伝子解明をめざした分子生物学的基盤技術の開発

开发基础分子生物学技术，旨在阐明甲藻麻痹性贝类合成基因

• 批准号: 17658094
• 负责人: 大島 泰克
• 金额: $ 2.05万
• 依托单位: Tohoku University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2005
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2005 至 2007
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-17658094/
• 关键词: 水産学; 生理活性; 生合成遺伝子; プランクトン; 麻痺性貝毒

1.一細胞からのPCRによる多型解析A.tamarense有毒株から一細胞ずつを収穫しcytochrome bの5'変異領域の配列に基づいた変異検出PCRによって得られた遺伝子配列を解析したところ、クローン培養株でありながら増幅断片長及び塩基配列が異なり株内に多様性があることが明らかになった。2.一細胞からの毒量分析蛍光化HPLC分析法での酸化反応条件の最適化により、A.tamarense有毒株の主成分であるC2の検出感度が6倍向上した。通常の分析法での回収率が34%と低かったため、遠心分離法を検討し標品による回収率が120%と良好なサンプル調製法を確立した。検出限界(S/N比=2)は11fmolと通常分析法で調べた有毒株の一細胞C2量を上回り、細胞を含まない培地の分析では培地由来夾雑物ピークとの分離も良好であった。無毒株の一細胞分析でもC1/C2の溶出時間にピークが検出されなかった。有毒株一細胞を47個分析したところ、通常分析での分析値付近のものが多かったものの検出限界以下のものや700fmolものもあり、クローン培養株内の毒生産能にも多様性が示唆された。

1. A.tamarense has a strain, a cell, a fragment length, and a nucleotide sequence in the 5'domain of cytochrome b. A.tamarense has a strain, a cell, a fragment length, and a nucleotide sequence in the 5' domain of cytochrome b. A. tamarense has a strain, a cell, a fragment length, and a nucleotide sequence in the 5 'domain of cytochrome b. 2. The sensitivity of C2 to the main component of A.tamarense was 6-fold higher than that of A.tamarense. The recovery rate of normal analysis method is 34%, and the recovery rate of telecentric separation method is 120%. The recovery rate of good separation method is established. The detection limit (S/N ratio =2) is 11fmol. The C2 content of one cell of the virus is adjusted by the usual analysis method. The analysis of the cell contains the culture medium. The isolation of the culture medium is good. A cell analysis of non-toxic strains shows that the dissolution time of C1/C2 is not stable. There are 47 strains in a cell, and the analysis value of the normal analysis is close to the detection limit of 700fmol.

项目成果

Non-toxic and toxic subclones obtained from a toxic clonal culture of Alexandrium tamarense (Dinophyseae): toxicity and molecular biological feature

从塔玛亚历山大藻（甲藻）有毒克隆培养物中获得的无毒和有毒亚克隆：毒性和分子生物学特征

• 发表时间: 2008
• 期刊: Harmful Algae (accented)
• 作者: Yuko Cho;Kaori Hiramatsu;Motoo Ogawa;Takuo Omura;Takashi Ishimaru and Yasukatsu Oshima
• 通讯作者: Takashi Ishimaru and Yasukatsu Oshima