脂質組織学の開拓とステロイドホルモン産生器官への応用

脂质组织学的发展及其在类固醇激素产生器官中的应用

基本信息

批准号：
17659056
负责人：
川真田聖一
金额：
$ 1.73万
依托单位：
Hiroshima University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至 2006
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-17659056/
关键词：
脂質質量分析ステロイドイオン化組織化学質量分析法分析

项目摘要

生体の主要な有機成分は、タンパク、糖と脂質である。これらのうちタンパクと糖については、研究が進展している。しかし、脂質は、試料作製の脱水操作で失われたり、特定の脂質に結合する物質がほとんど無いため、脂質の種類の同定は極めて困難である。本研究の目的は、組織や細胞中の脂質を、質量分析法(mass spectrometry)で角翠析して、脂質の種類を同定し定量化する方法を開拓し、ステロイドホルモン産生器官に応用することである。脂質の質量分析には、2つの技術的課題がある。第1に、脂質はイオン化しにくい傾向があるので、良いイオン化条件の検討が必要である。第2は、細胞や組織には多種類の脂質が含まれているので、測定や解析を困難にするおそれがある。研究では、ラットの副腎を取り出し、メタノールで抽出した。抽出液を、50%メタノールと0.1%蟻酸を含む水溶液で希釈して、イオンスプレー法(APCI)法を使い、イオンスプレー電圧5.500 Vで測定した。しかし、安定したピークは得られなかった。そのため、成分が既知の物質で測定を試みた。コレステロールなどのステロイド化合物をメタノールで溶解し、イオンスプレー法(APCI)法で測定したが、明瞭なピークは検出されなかった。次に、これらの測定物質を積極的にイオン化する必要があると考え、トリメチルクロロシランでシリル化させるなど、ガスクロマトグラフィーで使用される手法を試みているが、未だ安定して測定する方法を確立するには至っていない。

生物体的主要有机成分是蛋白质，糖和脂质。其中，研究是在蛋白质和糖上进行的。但是，在样品制备中脱水操作期间脂质丢失，或者很少有与特定脂质结合的物质，因此很难识别脂质类型。这项研究的目的是开发通过质谱法鉴定和量化组织和细胞中脂质的方法，并将其应用于产生类固醇激素的器官。脂质质谱法提出了两个技术挑战。首先，脂质往往不太可能电离，因此需要研究良好的电离条件。其次，由于细胞和组织包含多种脂质，因此测量和分析可能很困难。在研究中，将大鼠肾上腺去除并用甲醇提取。将提取物用含有50％甲醇和0.1％甲酸的水溶液稀释，并在5.500 V的离子喷雾电压下使用离子喷雾法（APCI）方法测量。但是，未获得稳定的峰。因此，尝试使用具有已知成分的物质进行测量。将类固醇化合物（如胆固醇）溶于甲醇中，并通过离子喷雾法（APCI）方法测量，但未检测到明显的峰。接下来，我们认为有必要积极地将这些物质离子化，并尝试在气相色谱法中使用的方法，例如用三甲基氯硅烷硅烷基化，但我们尚未建立一种稳定测量的方法。