权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

ジーンサイレンシングによるDNA修復異常細胞シリーズ樹立と発癌予防薬開発への応用

基因沉默DNA修复异常细胞系的建立及其在抗癌药物开发中的应用

基本信息

批准号：
17659179
负责人：
牟礼佳苗
金额：
$ 1.92万
依托单位：
Wakayama Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至 2006
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-17659179/
关键词：
がん予防 DNA修復シグナル伝達ジーンサイレンシング

项目摘要

本研究の目的は、RNAiジーン・サイレンシング法を用いてヒト正常組織由来株化細胞中のDNA修復系関連遺伝子を個別にノックダウンしてDNA修復異常細胞シリーズを樹立し、樹立した細胞シリーズを用いて食品由来物質のDNA修復系に与える影響を調べ、発がん抑制メカニズムを解明し、発がん予防薬の開発の応用に役立てることである。平成18年度の計画は、1.平成17年度にデザインしたDNA修復関連遺伝子をターゲットとした各遺伝子に最適なsiRNAをヒト由来正常細胞にトランスフェクトする2.得られた細胞のジーン・サイレンシング効果を、リアルタイムPCR法を用いて各DNA修復関連遺伝子の発現定量、およびタンパク定量を行なうことで確認し、細胞シリーズを樹立する3.樹立された細胞について、自然発生突然変異やDNAダメージ、アポトーシス、マイクロサテライト増幅等発がんの各過程の指標について解析を行ない、発がん関連指標のデータを蓄積する。ことであった。計画1において、永久的なジーン・サイレンシング効果を得るために、ベクター(レトロウィルス)およびトランスフェクトする正常細胞(大腸、あるいは皮膚由来)の選考・検討を行った。現在多用されている方法は、最高でも72時間と短いジーン・サイレンシング効果しか得られないものが多く、レトロウィルス・ベクターを用いた方法では長い効果を得られるものの、毒性の増加が懸念された。したがって、本研究の目的である細胞株シリーズの樹立への応用には、より詳細な検討が必要であることがわかった。計画2については、リアルタイムPCRシステムを用いた各DNA修復関連遺伝子の発現定量法およびタンパク定量の方法の確立を終えた。さらに、計画3についても各指標の測定方法の条件設定および確立を終え、がん細胞由来DNA修復異常細胞を用いて確立した方法の妥当性の確認を終えた。

The purpose of this study is to use RNAi protein synthesis method to identify DNA repair system-related genes in isolated cells derived from normal tissues and to establish DNA repair abnormal cells individually. 1. DNA repair-related gene expression and quantification of DNA repair-related gene expression and quantification of DNA repair-related gene expression and siRNA expression in normal cells; 2. DNA repair-related gene expression and quantification of DNA repair-related gene expression and siRNA expression in normal cells. 3. To establish indicators of various processes such as cell growth, natural evolution, sudden change, DNA loss, loss, increase, etc. to analyze and accumulate relevant indicators.ことであった。Project 1: Selection and evaluation of normal cells (large intestine and skin origin) for the purpose of obtaining the results of permanent and permanent cell culture. Now, the method of multi-use is to increase the suspense by 72 minutes and 30 minutes. The purpose of this study is to establish a cell line that is suitable for use in a variety of applications. Project 2: Establishment of a quantitative method for detecting and quantifying DNA repair related genes by PCR system In addition, in the third part of the project, the conditions for the determination of each index were established and the appropriateness of the method was confirmed.