遺伝性発がんハイリスク群モデル細胞株シリーズの樹立

遗传性致癌高危人群模型细胞系系列的建立

基本信息

批准号：
19659152
负责人：
牟礼佳苗
金额：
$ 2.05万
依托单位：
Wakayama Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2007
资助国家：
日本
起止时间：
2007 至 2008
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究は、RNAiジーン・サイレンシング法を用いて、遺伝性発がんハイリスク群のモデル細胞株シリーズを樹立し、効果的で安全な発がん予防法の開発に応用することを最終目的として行った。ターゲットとした遺伝子は、遺伝的発がんハイリスク群の原因遺伝子であるDNA修復系関連遺伝子(主にミスマッチ修復関連遺伝子)で、ヒト由来正常細胞を用い、各ミスマッチ遺伝子を個別にノックダウンし、DNA修復異常細胞株シリーズの樹立を試みた。最終年度である当該年度においては、前年度にデザインした各DNA修復関連遺伝子に最適のsiRNAを用い、種々のトランスフェクション法を試し、より長期にジーン・サイレンシング効果が得られる方法の確立に重点を置いて実験を行った。発がん試験法として、突然変異試験に加え、ゲノムの不安定性の指標であるMicrosatellite Instability、発がん関連遺伝子発現、アポトーシス法を用いた。永久的なジーン・サイレンシング効果を得るために、ベクター(レトロウィルス)およびトランスフェクトする正常細胞(大腸、あるいは皮膚由来)の選考・検討を行った。現在多用されている方法は、最高でも72時間と短いジーン・サイレンシング効果しか得られないものが多く、レトロウィルス・ベクターを用いた方法では長い効果を得られるものの、毒性の増加が懸念された。したがって、本研究の目的である細胞株シリーズの樹立への応用には、より詳細な検討が必要であることがわかった。今後、確立された方法をヒト由来正常細胞に応用して各DNA修復関連遺伝子の影響評価を詳細に行う。

这项研究的最终目的是使用RNAi基因沉默方法为高风险的遗传性致癌组建立一系列模型细胞系，并将其应用于有效和安全的预防癌症预防方法的发展。靶向基因是与DNA修复系统相关的基因（主要是与不匹配的维修相关基因），它们是负责高危遗传癌变组的基因。我们使用正常的人类衍生细胞单独击倒每个不匹配基因，并试图建立一系列DNA修复异常细胞系。在最后一年，使用siRNA进行了实验，该siRNA对于上一年设计的每个DNA修复相关基因是最佳的，并尝试了各种转染方法，重点是建立一种方法，该方法将在更长的时间内提供基因沉默效应。除突变研究外，我们还使用了微卫星不稳定性，这是基因组不稳定性，致癌方法和凋亡方法的指标，以及基因组不稳定性的指标。为了获得永久的基因沉默效应，选择并检查了载体（逆转录病毒）和转染的正常细胞（来自大肠或皮肤）并检查并检查。许多当前广泛使用的方法仅在最多72小时以最多72小时提供基因沉默效应，尽管使用逆转录病毒载体的方法可以提供长时间的影响，但人们担心毒性会增加。因此，发现建立细胞系系列的应用（这是本研究的目的）需要更详细的检查。将来，我们将在正常的人类细胞中应用既定方法，以评估每个DNA修复相关基因的作用。