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遺伝性発がんハイリスク群モデル細胞株シリーズの樹立

遗传性致癌高危人群模型细胞系系列的建立

基本信息

批准号：
19659152
负责人：
牟礼佳苗
金额：
$ 2.05万
依托单位：
Wakayama Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2007
资助国家：
日本
起止时间：
2007 至 2008
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究は、RNAiジーン・サイレンシング法を用いて、遺伝性発がんハイリスク群のモデル細胞株シリーズを樹立し、効果的で安全な発がん予防法の開発に応用することを最終目的として行った。ターゲットとした遺伝子は、遺伝的発がんハイリスク群の原因遺伝子であるDNA修復系関連遺伝子(主にミスマッチ修復関連遺伝子)で、ヒト由来正常細胞を用い、各ミスマッチ遺伝子を個別にノックダウンし、DNA修復異常細胞株シリーズの樹立を試みた。最終年度である当該年度においては、前年度にデザインした各DNA修復関連遺伝子に最適のsiRNAを用い、種々のトランスフェクション法を試し、より長期にジーン・サイレンシング効果が得られる方法の確立に重点を置いて実験を行った。発がん試験法として、突然変異試験に加え、ゲノムの不安定性の指標であるMicrosatellite Instability、発がん関連遺伝子発現、アポトーシス法を用いた。永久的なジーン・サイレンシング効果を得るために、ベクター(レトロウィルス)およびトランスフェクトする正常細胞(大腸、あるいは皮膚由来)の選考・検討を行った。現在多用されている方法は、最高でも72時間と短いジーン・サイレンシング効果しか得られないものが多く、レトロウィルス・ベクターを用いた方法では長い効果を得られるものの、毒性の増加が懸念された。したがって、本研究の目的である細胞株シリーズの樹立への応用には、より詳細な検討が必要であることがわかった。今後、確立された方法をヒト由来正常細胞に応用して各DNA修復関連遺伝子の影響評価を詳細に行う。

In this study, the RNAi test method used いて and the genetically modified のモデル cells The establishment of the plant and the effect of the safe and effective method of prevention are the opening of the method and the ultimate goal of the action.ターゲットとした缝子は、缝的発がんハイリスク群のreason伝子であるDNA Repair Related DNA Repair Related DNA Sub) で, ヒト origin normal cells を use い, each ミスマッチ人伝子を individual にノックダウンし, DNA repair abnormal cell line シリーズのEstablishment を test みた. The last year's results are the most suitable ones for the current year's results and the previous year's results for each DNA repair-related genetic code.ランスフェクション法をtrialし、より久久にジーン・サイレンシThe effect of the method is established and the key points are set and executed. Microsatellite Instability, 発がんrelated legacy 伝子発 appear, アポトーシス法を用いた. Permanent なジーン・サイレンシング effect を得るために、ベクター(レトロウィルス)およThe selection test of the normal cells of the びトランスフェクトするnormal cells (the origin of the large intestine and the あるいは skin)・検検を行った. Nowadays, the されている method is mostly used, and the highest でも72 time and short いジーン・サイレンシング effect しかget られないものがMany く, レトロウィルス・ベクターを use いた method では长いeffect をget られるものの, toxicity のincrease がsuspense された.したがって、The purpose of this study is to establish the cell line of シリーズのへの応 and use it. From now on, we will establish the method and use it in normal cells to evaluate the impact of DNA repair-related genes in detail.