上気道炎症の病態形成におけるToll-like receptor(TLR)の役割

Toll 样受体 (TLR) 在上呼吸道炎症发病机制中的作用

• 批准号: 17659531
• 负责人: 川内 秀之
• 金额: $ 2.18万
• 依托单位: Shimane University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2005
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2005 至 2006
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-17659531/
• 关键词: 上気道炎症; Toll-like receptor; TLR2ノックアウトマウス; 副鼻腔炎; 中耳炎; real time RT-PCR; Laser captured microdissection

1.マウス急性鼻炎モデルの作製急性鼻炎モデルと同様、C57BL6マウスを用いて、TLR2のアゴニストであるlipoproteinを点鼻投与し、鼻粘膜の急性炎症を誘導し、鼻腔粘膜についてHE染色にて検討を行い病理学的に検討した。また、粘膜におけるMIP-2発現について、免疫沈降-ウエスタンブロット法にて解析した。さらに、TLR2遺伝子欠損マウスを用いて、lipoproienあるいは生菌点鼻による鼻炎の病態について解析し、炎症病態の状況を観察した。2.マウス急性中耳炎モデルおよび内耳障害モデルの作製C57BL/6マウスの顎下部より中耳骨胞にTLRについてそのアゴニストを注入し、中耳炎成立後、骨胞を採取し、中耳貯留液中のMIP-2産生量(IL-8のマウス機能的ホモログ)をELISA法で測定した。さらに中耳粘膜や内耳の炎症所見を病理組織学的に検討した。さらに、TLR遺伝子変異マウス、TLR2ノックアウトマウスを用いて、肺炎球菌やインフルエンザ菌など、中耳炎の起炎菌を用いて骨胞に注入し、MIP-2発現および中耳粘膜さらには内耳の炎症所見について検討中である。3.上気道粘膜上皮細胞におけるTLR遺伝子発現慢性副鼻腔炎や鼻茸の患者から採取した鼻副鼻腔粘膜や鼻茸組織を用いて、免疫組織化学的検討(好酸球浸潤の程度、サイトカイン産生Th2細胞など)を行なった。さらにLaser-captured microdissection(LCM)を用いて、組織切片から鼻粘膜上皮や樹状細胞を切りだし、分子生物学的手法を用いて、TLRの発現を検討する系を確立した。4.気道上皮細胞・肥満細胞からのサイトカイン産生におけるアレルギー治療薬の抑制効果上気道の炎症病態に関わる肥満細胞や上皮細胞をIgEのクロスリンキングやPAMPにより刺激し、サイトカインやケモカイン産生のin vitroの実験系やin vivoでの急性鼻炎モデルを確立して、抗ヒスタミン薬や免疫修飾作用のある薬剤を用いた炎症病態の制御に関する種々の検討を行い、成果をあげた。5.IL-8遺伝子転写とTLR下流のシグナル伝達機構についてIL-8遺伝子プロモーター領域には、NF-κBおよびAP1結合エレメントが存在する。TLRの各種アゴニストを用いて鼻粘膜由来の上皮細胞の刺激を行い、IL-8遺伝子発現をノーザンブロット法かリアルタイムPCR法にて解析を行い、蛋白レベルの発現をウエスタンブロット法にて検討した。また、AP1を誘導するMAPKinase経路について、ウエスタンブロット法およびキナーゼアッセイにて検討した。NF-κB経路については、ルシフェラーゼアッセイでの検討を行った。

1. Acute Rhinitis, C57BL 6, TLR2, Lipoprotein, Nasal Mucosa, Acute Inflammation, HE Staining, Pathological Study. Mip-2 expression in mucosa, immunoprecipitation and analysis TLR2 gene deficiency in the use of antibiotics, lipoproien, anti-bacterial nose, rhinitis, inflammation, pathological analysis 2. The production of MIP-2 in the middle ear fluid (IL-8 function) was measured by ELISA after injection of TLR into the middle ear osteocytes, extraction of osteocytes and establishment of otitis media. The findings of inflammation in the middle ear mucosa and inner ear were examined pathologically. In addition, the TLR gene is different, TLR2 is different, pneumococcus is different, otitis media is different, MIP-2 is different, middle ear mucosa is different, inner ear inflammation is different. 3. TLR gene expression in upper tract epithelial cells was detected in patients with chronic paranasal sinusitis. Nasal mucosa and nasal antler tissues were examined by immunohistochemistry (degree of eosinophil infiltration, production of Th2 cells). Laser-captured microdissection(LCM) was used to establish a system for the analysis of TLR expression using molecular biological techniques, tissue sections, and dendritic cell dissection of nasal mucosa. 4. Pathway epithelial cells, fat cells, IgE, PAMP, stimulation, production, in vitro, and in vivo acute rhinitis. Anti-inflammatory agents are used to control inflammatory diseases. 5. IL-8 gene expression and TLR down-stream detection mechanism exist in the IL-8 gene expression domain, NF-κB and AP1 binding region. TLR is used to stimulate epithelial cells derived from nasal mucosa, IL-8 gene expression is analyzed by PCR, protein expression is studied by PCR. MAPKinase pathway induced by AP1 is discussed in detail below. Discussions on the NF-κB channel are ongoing.

项目成果

A rice-based edible vaccine expressing multiple T cell epitopes induces oral tolerance for inhibition of Th2-mediated IgE responses.

• DOI: 10.1073/pnas.0503428102
• 发表时间: 2005-11
• 期刊: Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America
• 影响因子: 11.1

IL-15 prevents allergic rhinitis through reactivation of antigen-specific CD8+ cells

• DOI: 10.1016/j.jaci.2006.02.018
• 发表时间: 2006-06-01
• 期刊: JOURNAL OF ALLERGY AND CLINICAL IMMUNOLOGY
• 影响因子: 14.2
• 作者: Aoi, Noriaki;Masuda, Tokuko;Yoshikai, Yasunobu
• 通讯作者: Yoshikai, Yasunobu

鼻アレルギー性炎症を抑制する薬剤

抑制鼻过敏性炎症的药物

• 发表时间: 2005
• 期刊: ENTONI 57
• 作者: Hideyuki kawauchi;Shingo kataoka;Hisashi Ohga;Akemichi Murata;Mitsuhiro Kimura;Noriaki Aoi;Ichiro Morikura;Kaoru Takamura;Yasuhiko Shimizu;Hidenori Takagi;石光亮太郎
• 通讯作者: 石光亮太郎

上気道アレルギー性炎症の制御に向けた研究の動向

控制上呼吸道过敏性炎症的研究趋势

• 发表时间: 2006
• 期刊: アレルギー科 21・6
• 作者: Noriaki Aoi;Tokuko Masuda;Daisuke Murakami;Toshiki Yajima;Hiroyuki Mizubuchi;Hisakata Yamada;Hideyuki Kawauchi;Yasunobu Yoshikai;川内秀之
• 通讯作者: 川内秀之

Interleukin(IL)-15のマウスアレルギー性鼻炎モデル実効相に及ぼす影響についての検討.

白细胞介素(IL)-15对小鼠过敏性鼻炎模型有效期的影响研究。

• 发表时间: 2005
• 期刊: 日本鼻科学会会誌 44・1
• 作者: Hideyuki kawauchi;Shingo kataoka;Hisashi Ohga;Akemichi Murata;Mitsuhiro Kimura;Noriaki Aoi;Ichiro Morikura;Kaoru Takamura;Yasuhiko Shimizu;Hidenori Takagi;石光亮太郎;Takaya Yamada;川内秀之;石光亮太郎;石光亮太郎
• 通讯作者: 石光亮太郎