タンパク質リン酸化調節因子の迅速かつ簡便なスクリーニング法

一种快速简便的蛋白质磷酸化调节剂筛选方法

• 批准号: 18659030
• 负责人: 小池 透
• 金额: $ 2.05万
• 依托单位: Hiroshima University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 2007
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-18659030/
• 关键词: キナーゼプロファイリング; リン酸化調節因子; 電気泳動法; キナーゼ阻害剤; フォスファターゼ阻害剤; ケミカルバイオロジー

タンパク質のリン酸化は,シグナル伝達,細胞周期の進行,遺伝子発現の制御などの多様な生命活動に関与している。生体系のおけるリン酸化シグナルの異常は,癌,神経疾患,代謝性疾患など様々な疾患の原因となっていることが明らかとなり,リン酸化調節因子の研究は,疾患の予防や治療にとってますます重要になっている。本研究は,タンパク質のリン酸化調節因子(キナーゼ阻害剤やフォスファターゼ阻害剤など)の網羅的なスクリーニングを迅速かつ簡便に行える創薬研究技術の開発を目的としている。本年度は,申請者の研究グループが開発した「基質タンパク質とそのリン酸化タンパク質の同時定量分析を可能にするリン酸アフィニティー電気泳動法」を用いた新しいキナーゼ阻害活性プロファイリング法の実施例の作成を行った。18年度に開発したリン酸アフィニティー電気泳動法に適したAblキナーゼの基質(基質ペプチドを有する人工タンパク質:GST-融合タンパク質)を用いて,既存のAblの阻害剤(グリベック)の共存下でAblキナーゼ反応を一定時間行い,リン酸アフィニティー電気泳動法で得られたタンパク質を分離定量した。リン酸化された基質とリン酸化されていない基質は,電気泳動ゲル上で2つのバンドとして検出される。この新しいキナーゼ阻害活性プロファイリング法に最適なキナーゼ反応条件(反応時間や使用するタンパク質基質の量,検出法など)を決定し,実施例のプロトコルを論文や学会で公開した。今後もこの新しい研究手法を創薬分野に紹介していく予定である。

タ ン パ ク qualitative の リ ン acidification は, シ グ ナ ル 伝, cell cycle の, heritage 伝 son 発 is の suppression な ど の many others な life activities に masato and し て い る. Raw system の お け る リ ン acidification シ グ ナ ル の abnormal は, cancer, god 経 disorders, metabolic disorders な ど others 々 の な disease causes と な っ て い る こ と が Ming ら か と な り, リ は の ン acidification adjustment factor research, disease の treatment to prevent や に と っ て ま す ま す important に な っ て い る. This study は タ ン パ ク qualitative の リ ン acidification adjustment factor (キ ナ ー ゼ resistance against tonic や フ ォ ス フ ァ タ ー ゼ resistance against tonic な ど) の snare of な ス ク リ ー ニ ン グ を quickly か つ simple line に え る gen 薬 research techniques の open 発 を purpose と し て い る. は this year, the applicant の research グ ル ー プ が open 発 し た "matrix タ ン パ ク qualitative と そ の リ ン acidification タ ン パ ク qualitative の quantitative analysis at the same time may を に す る リ ン acid ア フ ィ ニ テ ィ ー 気 swimming method" を with い た new し い キ ナ ー ゼ resistance against active プ ロ フ ァ イ リ ン の グ method be applied example の made を line っ た. 18th annual に open 発 し た リ ン acid ア フ ィ ニ テ ィ ー 気 swimming method に optimum し た Abl キ ナ ー ゼ の matrix (matrix ペ プ チ ド を have す る artificial タ ン パ ク mass: GST - fusion タ ン パ ク qualitative) を with い て, existing の Abl の resistance against tonic (グ リ ベ ッ ク) の coexist under で Abl キ ナ ー ゼ anti 応 を time line い, リ ン acid ア フ ィ ニ The ティ ティ electrokinetic method で is used to obtain the られたタ パ パ for the を separation and quantification of granular substances, which is た た. リ ン acidification さ れ た matrix と リ ン acidification さ れ て い な は い matrix, electric 気 swimming ゲ ル で 2 つ の バ ン ド と し て 検 out さ れ る. こ の new し い キ ナ ー ゼ resistance against active プ ロ フ ァ イ リ ン に グ method optimum な キ ナ ー ゼ anti 応 conditions (anti 応 time や using す る タ ン パ ク の mass matrix, 検 out method な ど) を し decision, be applied example の プ ロ ト コ ル を paper や learn で public し た. In the future, new <s:1> <s:1> research methods for <s:1> will be introduced, and the を drug differentiation に will be presented. <s:1> て く く will be determined. Youdaoplaceholder4.

项目成果

キナーゼプロファイリングのための新しいリン酸アフィニティー電気泳動法

一种用于激酶分析的新磷酸盐亲和电泳方法

• 发表时间: 2007
• 期刊: 生物物理化学 51
• 作者: 木下英司;木下恵美子;小池透;木下英司;木下英司
• 通讯作者: 木下英司

Phosphate affinity gel electrophoresis using a phosphate-binding tag molecule, Phos-tag, for protein kinase and phosphatase profiling

使用磷酸盐结合标签分子 Phos-tag 进行磷酸盐亲和凝胶电泳，用于蛋白激酶和磷酸酶分析

• 发表时间: 2007
• 作者: Onohara;N.;Nishida;N.;Inoue;R.;Kobayashi;H.;Sumimoto;H.;Sato;Y.;Mori;Y.;Nagao;T.;Kurose;H.;木下英司
• 通讯作者: 木下英司

Label-free kinase profiling using phosphate-affinity polyacrylamidegel electrophresis

使用磷酸盐亲和聚丙烯酰胺凝胶电泳进行无标记激酶分析

• 发表时间: 2007
• 期刊: Molecular ＆ Cellular Proteomics 6
• 作者: Seiji Yamada;Emiko Kinoshita-Kikuta
• 通讯作者: Emiko Kinoshita-Kikuta

Identification on Membrane and Characterization of Phosphoproteins Using an Alkoxide-bridged Metal Complex as a Phosphate-binding Tag Molecule

使用醇盐桥接金属络合物作为磷酸盐结合标签分子对膜进行鉴定并表征磷蛋白

• 发表时间: 2007
• 期刊: Journal of Biomolecular Techniques 18
• 作者: Cho;E.Y.;Cho;D.L;Park;J.H.;Kurose;H.;Caron;M.C;Kim;K.M.;Tsuyoshi Nakanishi
• 通讯作者: Tsuyoshi Nakanishi