デスレセプターリモデリングによるアポトーシス抵抗性を応用した異種膵島移植法の確立

通过死亡受体重塑应用细胞凋亡抵抗的异种胰岛移植方法的建立

• 批准号: 18659367
• 负责人: 伊藤 壽記
• 金额: $ 2.11万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 2007
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-18659367/
• 关键词: 異種移植; ブタ膵島; decoy Fas; 膜型FasL; cellular FLICE-like inhibitory protein (c-FLIP); 細胞傷害性; 細胞性免疫; アポトーシス

膵・膵島移植は1型糖尿病に対する唯一の根治療法であるが,問題点の一つとしてドナー不足が挙げられている.我々はこのドナー不足の解決策として,異種膵島移植の臨床応用に向け研究を進めている.異種膵島移植では,移植された膵島は,特にヒトCD8^+ CTLを介した細胞性免疫により拒絶される.我々は,新規細胞傷害抑制分子であるヒトdecoy Fas及び膜型FasLをブタ血管内皮細胞株(SEC)に過剰発現させることで,レシピエントCTLの異種細胞傷害性を抑制できることを報告してきた.今回,これらのアプローチに加え,ブタcellular FLICE-like inhibitory protein short/long form (c-FLIP_<S/L>)過剰発現による細胞傷害抑制効果を解析した.【方法】ネオマイシン耐性遺伝子を有するpCR3.1ベクターに全長ブタFLIP_<S/L>を組み込んだプラスミドを構築した.リポフェクション法を用いて目的遺伝子をSECに導入,G418にてselectionを施行,single cloneを樹立した.目的分子の発現はRT-PCRおよびWestern blottingにて確認した.健常人末梢血より分離したPBMCを,SECおよびヒトインターロイキン-2で混合培養,計14日間培養し,リンパ球を活性化,この活性化リンパ球より磁気ビーズを用いてCD8^+ CTLのみ分離しeffector cellとして用いた.傷害性は^<51>Cr release assay,アポトーシス細胞はTUNEL染色およびAnnexin染色にて解析した.【結果】RT-PCRおよびWestern blottingにて,高発現株をselectionした.Effector cellのparental SECに対する傷害性は高度であったが,c-FLIP_<S/L> transfectantでは,この傷害性が抑制されていた.また,c-FLIP_Lの方がc-FLIP_Sよりも傷害抑制効果が顕著であった.TUNEL染色およびAnnexin染色では,parental SECよりもtransfectantにおいて,アポトーシス細胞の減少を認めた.【結論】ブタc-FLIP_<S/L>の過剰発現により,ヒトCD8^+ CTL細胞傷害性を抑制できることが示された.これらのアプローチはブタ異種移植における細胞性免疫拒絶反応の制御に寄与できる.

The only way to cure type 1 diabetes is to get a radical cure. We do not have enough information to make a decision on how to make a decision, and several kinds of transplant beds are used for further research. Several kinds of mice were transplanted, and CD8 ^ + CTL was specially used to induce cellular immune rejection. We note that the new cell damage inhibitor decoy Fas and membrane-type FasL antigen vascular endothelial cell line (SEC) have been successfully detected, and the cell damage of CTL has been inhibited by cell damage inhibition. This time, there is a significant increase in the number of cellular FLICE-like inhibitory protein short/long form (CPM FLIPIPT). The results show that the cell damage is harmful and the results are analyzed. [methods] there is a significant increase in the tolerance of pCR3.1 cells. Flip _ & lt;S/L> is responsible for the overall length of the system. The purpose of this method is to use the purpose to import the SEC, the G418 selection, and the single clone to establish the system. Objective to verify that the RT-PCR has been confirmed by the Western blotting operator. The peripheral blood of normal people is separated from PBMC, and SEC is separated from effector cell. After 14 days of incubation, the ball is activated, and the magnetic device is separated by CD8 ^ + CTL. The results of TUNEL staining and Annexin staining were analyzed. [results] RT-PCR

项目成果

Adenoviral-mediated overexpression of membrane-bound human FasL and human decoy Fas protect pig islets against human CD8+ CTL-mediated cytotoxicity.

腺病毒介导的膜结合人 FasL 和人诱饵 Fas 的过度表达可保护猪胰岛免受人 CD8 CTL 介导的细胞毒性。

• DOI: 10.1016/j.transproceed.2006.10.072
• 发表时间: 2006
• 期刊: Transplantation proceedings
• 影响因子: 0.9
• 作者: K. Kawamoto;M. Tanemura;H. Komoda;T. Omori;Y. Fumimoto;K. Shimada;T. Deguchi;A. Saga;A. Kakuda;T. Nishida;Y. Sawa;T. Ito
• 通讯作者: T. Ito

Inhibition of donor‐derived T cells trafficking into target organs by FTY720 during acute graft‐versus‐host disease in small bowel transplantation

• DOI: 10.1111/j.1365-2249.2006.03175.x
• 发表时间: 2006-10
• 期刊: Clinical & Experimental Immunology
• 影响因子: 4.6
• 作者: J. Song;Toshinori Ito;C. Matsuda;Gang Miao;Masahiro Tanemura;Toshirou Nishida;M. Nozawa;Hideo Matsuda;Yoshiki Sawa

【糖尿病と再生医療】膵β細胞再生医療の近未来 膵臟移植の現況と将来展望

[糖尿病与再生医学] 胰腺β细胞再生医学的近期前景 胰腹移植的现状与未来展望

• 发表时间: 2007
• 期刊: Diabetes Frontier 17 (3)
• 作者: 伊藤壽記;種村匡弘
• 通讯作者: 種村匡弘

Significant inhibition of human CD8(+) cytotoxic T lymphocyte-mediated xenocytotoxicity by overexpression of the human decoy Fas antigen.

通过人诱饵 Fas 抗原的过度表达，显着抑制人 CD8( ) 细胞毒性 T 淋巴细胞介导的异种细胞毒性。

• 发表时间: 2006
• 期刊: Transplantation 81 (5)
• 作者: Kawamoto K;Tanemura M;Nishida T;et al.
• 通讯作者: et al.

【実地医家のためのリンスリン療法】わが国における膵臟・膵島移植の現況と展望

[执业医师的Rinsurin疗法]日本胰腺阴道和胰岛移植的现状和前景

• 发表时间: 2007
• 期刊: 綜合臨床 56(1)
• 作者: 伊藤壽記;種村匡弘;菰田弘
• 通讯作者: 菰田弘