intact OHCを用いたsiRNAによる至適prestin発現密度の直接解析

目的:内耳再生医療のメインターゲットは最も受傷性の高いOHC運動能の回復である。再生機構として、支持細胞のOHCへの分化転換やOHCの自己修復が想定されている。近年、内耳の分化誘導に関与している遺伝子であるAtoh1の内耳内の導入により支持細胞から"有毛細胞様細胞"への分化転換の可能性が報告され、運動能の回復による聴力の回復が示唆されている。しかし、"蝸牛増幅機構"回復のためのprestinの至適発現量はわかっていない。その前段階として正常聴力に必要なprestin発現量を発達段階のマウスを用いて推定した。結果:C57BL/6JマウスOHCのprestin発現量の計測C57BL/6Jマウスの生後5日目(P5)から生後18日目(P18)までのOHCを用いて、パッチクランプ法にて膜容量の変化を測定した。さらにlinear capacitance, non-1inear capacitanceより各日齢におけるprestin電荷密度を算出した。PrestinはP6より発現しその電荷密度はP18でプラトーに達し、10,956e^-/・m^2であることがわかった。また、OHCの運動能を反映するDPOAEを測定したところP11以降で反応が見られP14でmatureに達すること、聴性脳幹反応(ABR)においてもP14でmatureに達することから、正常聴力獲得のために必要なprestin電荷密度は9,400e^-/・m^2以上であることが示唆された。

目的:内耳再生医療のメインターゲットは最も受傷性の高いOHC運動能の回復である。再生機構として、支持細胞のOHCへの分化転換やOHCの自己修復が想定されている。近年、内耳の分化誘導に関与している遺伝子であるAtoh1の内耳内の導入により支持細胞から"有毛細胞様細胞"への分化転換の可能性が報告され、運動能の回復による聴力の回復が示唆されている。しかし、"蝸牛増幅機構"回復のためのprestinの至適発現量はわかっていない。その前段階として正常聴力に必要なprestin発現量を発達段階のマウスを用いて推定した。結果:C57BL/6JマウスOHCのprestin発現量の計測C57BL/6Jマウスの生後5日目(P5)から生後18日目(P18)までのOHCを用いて、パッチクランプ法にて膜容量の変化を測定した。さらにlinear capacitance, non-1inear capacitanceより各日齢におけるprestin電荷密度を算出した。PrestinはP6より発現しその電荷密度はP18でプラトーに達し、10,956e^-/・m^2であることがわかった。また、OHCの運動能を反映するDPOAEを測定したところP11以降で反応が見られP14でmatureに達すること、聴性脳幹反応(ABR)においてもP14でmatureに達することから、正常聴力獲得のために必要なprestin電荷密度は9,400e^-/・m^2以上であることが示唆された。