前庭器官の器官培養技術を応用した有毛細胞、神経節細胞間シナプス再形成の試み
尝试利用前庭器官培养技术再生毛细胞和神经节细胞之间的突触
基本信息
- 批准号:14657429
- 负责人:
- 金额:$ 2.18万
- 依托单位:
- 依托单位国家:日本
- 项目类别:Grant-in-Aid for Exploratory Research
- 财政年份:2002
- 资助国家:日本
- 起止时间:2002 至 2003
- 项目状态:已结题
- 来源:
- 关键词:
项目摘要
目的:aminoglycoside (AG)による有毛細胞の細胞死がapoptosisであることを明らかにし、その細胞障害を引き起こす主要な酵素を解明する。方法:生後6日目のマウス(C57BL/6J)の蝸牛を用い、基底回転側3分の2を培養組織とした。培養後固定しphalloidin-FITCで染色後、レーザー顕微鏡で有毛細胞を観察した。AGはneomycin (NM)を0.1-0.5mM、1mMで用い、calpain inhibitorとしてleupeptinを、caspase inhibitorとしてはBAFを用いた。TUNEL法による染色にはApopTag Peroxidase In Situ Apoptosis Detection Kit (Intergen)を用いた。結果:NM群では濃度依存性に有毛細胞の障害が観察され、0.1mMから外有毛細胞の、0.4mMから内有毛細胞の減少が認められ、内外有毛細胞の比較では外有毛細胞の方が易障害性であった。leupeptin群では全ての濃度のNMに対し90%以上の外有毛細胞の生存が認められた。内有毛細胞では高濃度のNMに対してはleupeptinによる効果は認められなかった。またBAF群ではneomycinの濃度が0.5mM、1mMでわずかに有毛細胞の生存数の増加を認めたが、その効果はleupeptinの効果に比較するとごく軽微であった。またneomaycin群の組織をTUNEL法で染色した所、有毛細胞と一致する部位にTUNEL陽性細胞が認められた。この陽性細胞はcontrol群では認められなかった。考察:TUNEL法による観察結果から、このようなAGによる細胞障害はapoptosisの経路によってもたらされると考えられた。さらにcalpainがAGの細胞障害のメカニズムにより強く関与していることが示唆された。
Objective:Aminoglycoside (AG) is an important enzyme in the process of apoptosis of hairy cells. Methods: On the 6th day after birth, snails (C57BL/6J) were cultured in medium, 3 parts of basal gyrus and 2 parts of basal gyrus. After culture, fixation with phalloidin-FITC staining, microscopical observation of hairy cells AG neomycin (NM) 0.1-0.5mM, 1mM, calpain inhibitor, leptin inhibitor, caspase inhibitor, BAF inhibitor TUNEL method ApopTag Peroxidase In Site Apoptosis Detection Kit (Intergen) Results:NM group showed concentration-dependent inhibition of hairy cells, 0.1 mM of outer hairy cells, 0.4 mM of inner hairy cells, and 0.1 mM of outer hairy cells. The concentration of leptin in the serum was higher than 90% and the survival rate of hairy cells was higher than that in the control group. The hair cells in the body are highly concentrated in NM, and the leupeptin is not detected. When the concentration of neomycin in BAF group was 0.5 mM and 1mM, the survival number of hairy cells increased. TUNEL staining of neomaycin group was used to detect TUNEL positive cells in the same sites as hairy cells. The positive cells were identified by the control group. Investigation:TUNEL method to detect the results of cell damage, apoptosis and apoptosis This is the first time that we've had a problem with calpain.
项目成果
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