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長期増強現象を担うPDZドメイン含有蛋白質の網羅的分子スクリーニング法の開発

开发针对长时程增强现象的含 PDZ 结构域蛋白质的综合分子筛选方法

基本信息

批准号：
19659052
负责人：
廣瀬謙造
金额：
$ 2.11万
依托单位：
Nagoya University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2007
资助国家：
日本
起止时间：
2007 至 2008
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-19659052/
关键词：
シナプス可塑性中枢神経 PDZドメイン長期増強スクリーニング

项目摘要

本研究ではLTPなどのシナプス可塑性の制御に関わるPDZタンパク質を、網羅的かつ低コストで精度良く解析する技術基盤を確立し、シナプス可塑性を制御するPDZタンパク質をゲノムワイドに探索することを目的としている。この目的のため、平成19年度においては、細胞外領域にHAタグ配列を付加したGluR1サブユニットを用いることによってAMPA型グルタミン酸受容体GluR1サブユニットのシナプス後部細胞膜への移行をモニターするアッセイ系を構築したが、本年度はこのアッセイ系によって実際にシナプス可塑性をモニターできるかについて調べた。その結果、TTXなど神経活動を変化させる薬物を前投与することによって、膜に存在するGluR1サブユニットの量が変化することが明らかとなった。しかも、このGluR1サブユニット膜移行の検出は定量的かつ高感度であり、スクリーニングに耐えられるレベルであることが確認された。また、本研究で用いるsiRNA発現ベクターはEPRIL法で作製されるが、このsiRNA発現ベクターは様々な配列の混合物である。そこで、この混合物が実際に高いノックダウン効果を示すかどうかを調べた。その結果、リン酸カルシウム法で導入を行った場合、神経細胞内の分子が高効率にノックダウンされることが示された。その他、ハードウェアの面では、96穴プレートで画像を自動的に取得して効率の良いスクリーニングを可能とするシステムを構築した。以上、シナプス可塑性を担う分子を網羅的にスクリーニングする技術が確立された。

This study aims to establish a technical base for PDZ quality control and network analysis with good accuracy. The objective of this study was to construct a system for the migration of HA from the posterior cell membrane of GluR1, an AMPA-type acid receptor, in the extracellular domain. This year, the system was modified to adjust the plasticity of HA from the extracellular domain. The results, TTX, and mental activity are changed by the amount of material that is present in the membrane.しかも、このGluR1サブユニット膜移行の検出は定量的かつ高感度であり、スクリーニングに耐えられるレベルであることが确认された。In this study, siRNA was generated using a mixture of siRNA and EPRIL. This mixture is highly effective in the treatment of chronic diseases. As a result, the molecular structure of the protein was introduced into the brain cells at a high efficiency. All other features are available on the 96-point display screen. The screen can be automatically configured to achieve high performance. The above mentioned technologies are established in the field of molecular plasticity.