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時間窓を拡張した次世代型単分子in vivoイメージングの実現

延长时间窗的下一代单分子体内成像的实现

基本信息

批准号：
22K18358
负责人：
廣瀬謙造
金额：
$ 16.64万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Challenging Research (Pioneering)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-06-30 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K18358/
关键词：
単分子イメージング

项目摘要

解析時間窓を飛躍的に拡張する蛍光標識技術の開発分～数時間オーダーの単分子イメージングの実現には、強い励起光照射下でも単分子由来の蛍光輝点が長期に亘って見られるようにする必要があるが、本研究では従来にないコンセプトでこれを実現する。すなわち、光退色により蛍光輝点が減っていっても、次々と新しい輝点が生ずるようにすることで、常にまばらに蛍光輝点がある状態を作り出すというコンセプトである。この新しいコンセプトを廣瀬が開発を進めてきたDeQODE法をベースとして実装する。DeQODE法は、標的蛋白質に融合させたタグ蛋白質（DeQODEタグ）に添加した色素が結合するとその蛍光が ONとなることで狙った蛋白質を蛍光標識する技術である。DeQODEタグと色素の結合は可逆的であるため、原理的には色素が退色しても、順次新しい色素と交換され、蛍光輝点がまばらな状態を長時間にわたって維持できると考えられる。今年度は、持続的に単分子イメージングに適した密度で明るい蛍光輝点が得られるように、DeQODEタグへの色素結合領域およびその近傍へ変異導入や、色素の誘導体化による構造展開により、結合・解離のキネティクスの最適化に取り組んだ。具体的には、DeQODEタグを細胞膜に発現させた培養細胞に種々の色素の融合体を添加した際にDeQODEタグとの結合・解離に伴って繰り返し現れる蛍光輝点の軌跡を解析した。ここで、加える色素の種類や濃度、DeQODEタグの変異体の種類の組み合わせを試し、長時間の単分子イメージングに適した条件を決定することができた。

During the analysis, the photoluminescence optical technology is used for several minutes and several minutes. In this study, it is necessary to analyze the origin of phosphor molecules under the excitation of light, and the results of this study are as follows. The color of the light, the light, the light. As a result, the new DeQODE method is required to improve the quality of the equipment. DeQODE method, protein fusion, DeQODE protein fusion, DeQODE protein fusion, protein fusion DeQODE pigments are combined with reversible pigments, faded pigments, new pigments, phosphors, and long-term maintenance tests. This year, the molecular density measurement data show that the light point is sensitive, the DeQODE color is used in the field, the pigments are used to develop the system, and the solution is used to optimize the system. The membrane of the cell membrane of the cell was detected by the specific DeQODE and the cell membrane of the cell was cultured. The fusion of several kinds of pigments was added to the cell membrane of the cell. The combination of dissociation and dissociation was carried out by scanning electron microscopy (UV). The photoluminescence dot was used to analyze. The temperature, the content of pigment, the system of DeQODE, and the conditions of long-term monitoring determine the quality of the system.