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味細胞内情報伝達のin situイメージング法による甘味感知の分子機構の解明

利用味觉细胞内信号传输的原位成像阐明甜味检测的分子机制

基本信息

批准号：
15650069
负责人：
廣瀬謙造
金额：
$ 2.11万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至 2004
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究では、生きた味細胞の細胞内情報伝達物質応答を直接in situでイメージングする技術を開発し、この実験系を用いて甘味を感知する分子機構の解明を目指している。この目的のため、1)細胞内シグナル分子に対する蛍光プローブを味細胞特異的に発現するマウス個体(味細胞機能レポーターマウス)の作出、2)甘味物質に対する味細胞内シグナル応答の可視化解析、3)受容体候補遺伝子発現パターンの解析、という流れで研究を遂行する計画であった。平成15年度においては、GFPとカルモジュリンからなるinverse pericamをgustducinプロモータの下流につないだコンストラクトをトランスジーンとして受精卵に導入し、味細胞内カルシウム動態を解析しうるマウスの作出を試みた。PCRおよびサザンプロットを用いてジェノタイピングし、トランスジーンを持ったマウスを得ることができた。本年度はこれらのトランスジェニックマウスにおいて、inverse pericamが味細胞に発現しているかについて解析した。共焦点顕微鏡を用いて味蕾の蛍光イメージングを行った結果、ほとんどのマウスの味細胞において蛍光強度がバックグランドレベル以下であったが、ひとつのマウス系統においては、味細胞と考えられる細胞で蛍光を認めることができた。しかしながら、蛍光は微弱であり、また細胞内で不均一に存在し、発現した蛋白質がアグリゲートを形成してた。一方、培養細胞においてはinverse pericamが正常に発現し、機能することが確認されたことから、inverse pericamは味細胞に対して毒性を有することが推定された。従って、今後この問題を回避するためにinducibleな発現系を用いるべきであることが明らかとなった。

In this study, the intracellular information of raw and raw cells was directly transmitted into the material. situでイメージングするTechnologyを开発し、この実験式を用いてsweet tasteをperceptionするmolecule mechanismの解明をocular fingerしている.このpurposeのため、1) Intracellular シグナルmolecules に対する荍光プローブを taste cells The creation of a special に発成するマウス individual (Taste Cell Function レポーターマウス), 2 )Visual analysis of the sweet taste substance に対する within the cells of シグナル応, 3) Receptor candidates The remaining analysis and analysis of the current situation and the implementation of the plan are carried out. 2015 においては、GFP とカルモジュリンからなるinverse Pericamをgustducinプロモータの色につないだコンストラクトをトランスジーンとしてThe fertilized egg is introduced and the カルシウムdynamic analysis in the taste cells is made and tested. Use PCR technologyし、トランスジーンをholding ったマウスをget ることができた. This year's はこれらのトランスジェニックマウスにおいて, inverse pericamがgust cell に発appears しているかについてanalytic した. Confocal microscopy using the light source of the light buds Fruit, ほとんどのマウスの flavor cell において蛍Light intensity がバックグランドレベル下であったが、ひとつのマウス System においては, flavor cells と考えられる cells で蛍光を cognizance めることができた.しかしながら, 荍光は feeble であり, またunevenness in the cell exists し, 発appears したprotein がアグリゲートを formation してた. On the one hand, the cultured cells are normal and the pericam is normal and the function is confirmed and inverse. Pericamは flavor cellsに対してtoxicityを有することが presumedされた.従って, このproblem をavoidance するためにinducibleな発appears to be used いるべきであることが明らかとなった.