アルツハイマー病新規治療戦略:前駆体遺伝子エクソン17破断によるAβ生成抑制機構

阿尔茨海默病的新治疗策略：通过破坏前体基因的外显子 17 抑制 Aβ 产生的机制

• 批准号: 19659294
• 负责人: 松井 宏晃
• 金额: $ 1.98万
• 依托单位: St.Marianna University School of Medicine
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2007
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2007 至 2008
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-19659294/
• 关键词: アルツハイマー病; βアミロイド蛋白質前駆体遺伝子; 選択的スプライシング; エクソンスキッピング; エクソンスプライシング促進配列; エクソンスプライシング抑制配列; モルフォリノオリゴヌクレオチド; 2'-0-Met RNA

本研究は、Aβ前駆体(APP)遺伝子エクソン17破断によるAβ生成抑制法の確立を目的として実施した。樹立したAPPミニジーン発現SH-SY5Y細胞を用い、アンチセンスオリゴ(AO)のエクソン17破断作用をRT-PCR法にて検討した。平成19年度の研究から、モルフォリノAOは安定だが無電荷のために細胞内導入効率が非常に低いことが判明した。そこで、安定性及び有電荷性を考慮し、5種類の2'-0,4'-C-ethylene-bridged nucleic acid (ENA)と2'-O-methyl RNAのキメラAO(SD17(+1691+146)、SS17(+136/+160)、SS16(-12/+13)、BP16(-37/-13)、ESE4(+971+122)を合成した。SD17/SS16およびSS17/SS16の共導入により、エクソン17破断を確認した。次に、native SH-SY5Y細胞の内在性APP遺伝子を標的にエクソン17破断活性を調べると、APPミニジーン発現SH-SY5Y>native SH-SY5Yであった。この結果は、内在性APP遺伝子由来mRNAの半減期が〜20時間と長いことに起因するものと推測した。本研究結果は、エクソン17破断によりAβ産生を抑制できる可能性を示してはいるが、既報の筋ジストロフィーの原因遺伝子、ジストロフィン遺伝子のエクソン破断に比べると、低効率であった。今後、APP遺伝子エクソン17破断をアルツハイマー病治療に応用するためには、神経細胞内へのAOの効率的な導入法の開発、あるいは、AOに代わる、ベクター等を用い細胞内でアンチセンスRNAを発現させ、スプライシングを制御する方法の開発、加えて、脳内へのAO移行性を高める方法の開発などが必要である。

は this study, A beta before 駆 body (APP) heritage 伝 son エ ク ソ ン 17 breaking に よ る の way of A beta angiostatin and establish を purpose と し て be applied し た. Establish し た APP ミ ニ ジ ー ン 発 now SH SY5Y cells を い, ア ン チ セ ン ス オ リ ゴ (AO) の エ ク ソ ン 17 breakage function を rt-pcr method に て beg し 検 た. Pp.47-53 19th annual の research か ら, モ ル フ ォ リ ノ AO は settle だ が without charge の た め に cells into sharper rate very low に い が こ と が.at し た. Youdaoplaceholder0 と で で, stability and び charge を consider と, 5-type <s:1> 2'-0,4' -c ethylene-bridged nucleic acid (ENA)と2' -o-methyl RNA の キ メ ラ AO (SD17 (+ 1691 + 146), SS17 (+ 136 / + 160), SS16 (- / + 12, 13), BP16 37 (- / - 13), ESE4 (+ 971 + 122) を synthetic し た. SD17/SS16およびSS17/SS16 <s:1> jointly import によ によ, エ ソ ソ た 17 break を to confirm た た. Time に, native SH SY5Y cells の internality APP heritage 伝 を son mark に エ ク ソ ン 17 rupture activity を adjustment べ る と, APP ミ ニ ジ ー ン 発 now SH SY5Y - > native SH - SY5Y で あ っ た. The 伝 result of <s:1>, the internal APP, the 伝 offspring, the mRNA <s:1> half-reduction period が to 20, the と time is long, the <s:1> とに cause する と と と speculation, the た. This study は, エ ク ソ ン 17 breaking に よ り A beta を an adverse で き を る possibility in し て は い る が, both reported の reinforcement ジ ス ト ロ フ ィ ー の reason heritage 伝, ジ ス ト ロ フ ィ ン posthumous son 伝 の エ ク ソ ン breaking に than べ る と, low rate of unseen で あ っ た. In the future, the APP but 伝 エ ク ソ ン 17 breaking を ア ル ツ ハ イ マ ー disease treatment に 応 with す る た め に は, god 経 intracellular へ の AO の sharper rate な import method の 発, あ る い は, AO に わ る, ベ ク タ ー い を in intracellular で ア ン チ セ ン ス RNA を 発 now さ せ, ス プ ラ イ シ ン グ を suppression す る method の 発, plus え て, Youdaoplaceholder0 within へ <s:1> AO mobility を high める method <e:1> development な が が が necessary である.

项目成果

Regulation of the human tryptophan hydroxylase-2 gene promoter activity in immortalized serotonergic RN46A cells.

永生化血清素能 RN46A 细胞中人色氨酸羟化酶 2 基因启动子活性的调节。

• 发表时间: 2008
• 作者: Hiroaki Matsui

Regulation of the human tryptophan hydroxylase-2 gene promoter activity in immortalized serotonergic RN46A cells

永生化血清素能 RN46A 细胞中人色氨酸羟化酶 2 基因启动子活性的调节

• 发表时间: 2007
• 作者: Hiroaki Matsui

Regulation of the tryptophan hydroxylase-2 gene promoter activity in immortalized serotonergic RN46A cells.

永生化血清素能 RN46A 细胞中色氨酸羟化酶 2 基因启动子活性的调节。

• 发表时间: 2008
• 期刊: Fundamental Clinical Pharmacology 22(Suppl. 2)
• 作者: Tomoko Hiroi