ヒトD_3ドーパミン受容体アイソフォームの発現調節および細胞内情報伝達機構

人D_3多巴胺受体亚型的表达调控及细胞内信号转导机制

• 批准号: 07671093
• 负责人: 松井 宏晃
• 金额: $ 1.47万
• 依托单位: St. Marianna University School of Medicine
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 1996
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07671093/
• 关键词: D_3ドーパミン(DA)受容体; ヒト神経芽細胞腫SY-5Y細胞; 逆転写・ポリメラーゼ連鎖(RT-PCR)反応; long PCR法

平成7年度の研究において、ヒト神経芽細胞腫SY-5Y細胞に発現しているD_3DA受容体mRNAに由来するRT-PCR産物の他に、約100-bp分子量の小さいRT-PCR断片を得た。この分子量の小さな断片は、既報のヒトD_3DA受容体cDNAの構造と比較すると98-ntの欠失を伴っていた。この欠失D_3DAは実際にタンパク質に翻訳されているものと推定されるが、DA受容体としてのリガンド結合能を有しておらず、その機能は明らかにすることができなかった。ヒトD_3DA受容体mRNAは約8kbであり、その構造を明らかにするには、転写開始点近傍の領域までを含むcDNAが必要であるため、D_3DA受容体を多量に発現しているヒト黒質のポリ(A)^+RNAを基質にRT-PCRを行い、部分cDNAライブラリーを作成、ヒトD_3DA受容体全翻訳領域に相当するcDNA断片をプローブにスクリーニングを試みたが、十分な長さの5'非翻訳領域を含むcDNAクローンは得られなかった。ヒト末梢血白血球より抽出したゲノミックDNAを5種の制限酵素で切断後、アンカーオリゴヌクレオチドを接続、ヒトD_3DA受容体遺伝子翻訳開始点付近の配列を基に作製した2種のプライマーとアンカーオリゴヌクレオチドに対するプライマーを用いたlong PCR法に準じた方法により、ヒトD_3DA受容体遺伝子5'非翻訳領域を増幅することを試みたが、解析に十分な長さの5'非翻訳領域断片を得ることができなかった。Long PCR反応条件の最適化を試みたが、おそらく5'非翻訳領域のGC含有量が多いためか、十分な長さの断片は得られなかった。そこで、ヒトD_3DA受容体全翻訳領域に相当するcDNA断片をプローブに用い、ヒロ胎盤ゲノムDNAライブラリーから、ヒトD_3DA受容体遺伝子5'非翻訳領域を含むファージクローンを得、現在その構造を解析中である。

In the study conducted in 2007, we obtained a small RT-PCR fragment of about 100-bp molecular weight, which was produced in SY-5Y cells and derived from D3DA receptor mRNA. The molecular weight of the fragment was compared with that of the reported D_3DA receptor cDNA. The missing D_3DA can be used to determine the binding energy of the DA receptor and the function of the DA receptor. D_3DA receptor mRNA is about 8kb in length, and the structure of D_3DA receptor mRNA is about 8 kb in length, and the region near the start point of D_3DA receptor mRNA is about 8 kb in length, and the region near the start point of D_3DA receptor mRNA is about 8 kb in length. The 5'untranslated domain contains cDNA. The DNA of peripheral blood leukocytes was extracted from 5 kinds of restriction enzymes, which were cut off, released, connected and aligned with D_3DA receptor DNA. The DNA of peripheral blood leukocytes was extracted from 5 kinds of restriction enzymes. The DNA of peripheral blood leukocytes was extracted from D_3DA receptor DNA. D_3DA receptor fragment 5'non-inverted domain increases in amplitude, analyzes 5' non-inverted domain fragments, and determines whether the 5'non-inverted domain fragments are present. Long PCR reaction conditions were optimized for GC content in the 5'non-inverted domain. For example, cDNA fragments equivalent to the full-length domain of the D_3DA receptor can be used in the open field, the placenta essential DNA can be amplified, and the 5'non-inverted domain of the D_3DA receptor gene can be obtained and the current structure can be analyzed.

项目成果

南雲智子: "ヒトβアミロイド蛋白質前駆体関連蛋白質(APPH/APLP2)遺伝子プロモーター領域の機能解析" 日本神経精神薬理学雑誌. 16. 337 (1996)

Tomoko Nagumo：“人 β-淀粉样蛋白前体相关蛋白 (APPH/APLP2) 基因启动子区域的功能分析”，日本神经精神药理学杂志 16. 337 (1996)。