分裂酵母の細胞間認識に関与する新規なガラクトース鎖認識タンパク質の解析

裂殖酵母细胞间识别中涉及的新型半乳糖链识别蛋白的分析

• 批准号: 16780233
• 负责人: 田中 直孝
• 金额: $ 2.37万
• 依托单位: Kagawa University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2004
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2004 至 2005
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-16780233/
• 关键词: 分裂酵母; 糖鎖; ガラクトース

恒常的な凝集性を示す分裂酵母変異株由来のゲノムDNAマイクロアレイによって、過剰発現しているGPI-アンカー型のレクチン様タンパク質をコードしている遺伝子(gsf1^+)を同定した。セリン/スレオニンリッチな繰返し配列を有し、大腸菌を介したクローニングにより欠落することから、分裂酵母内で遺伝子組換え及びクローニング操作を行った。gsf1^+遺伝子を野性株に過剰発現させると著しい凝集を示した。Gsf1-HA tag融合タンパク質を作製し間接免疫染色法により確認した結果、細胞膜へ局在していることが分かった。凝集株に対して本遺伝子の破壊を行った結果、凝集性は消失した。本凝集性はカルシウム依存性を示し、各種単糖(マンノース、ガラクトース、シアル酸など)による阻害効果を確認した結果、ガラクトース及びシアル酸に対して凝集阻害が確認された。また、本遺伝子をO-マンノース転位酵素遺伝子の一つを破壊したogm1破壊株で発現させた結果、凝集性が確認できなかったことから、Gsf1タンパク質のレクチン様活性の維持にはセリン/スレオニン領域のO-結合型糖鎖修飾が必要であることが示唆された。ガラクトース鎖認識領域が繰返し配列上流のN末側192アミノ酸領域内に存在する可能性を確認するために、GPI-アンカー型膜タンパク質であるα-グルコシダーゼ及びα-アミラーゼのN-末端側にGsf1-N192を融合したキメラタンパク質を作製した。発現を試みた結果、凝集性を示さないことからN末側192アミノ酸領域のみでは凝集活性を持たないことが分かった。繰返し配列内にカルシウムとの結合や細胞壁を貫通し、安定な凝集性の維持に関わる領域が存在することが示唆された。遺伝子工学的手法を用いてガラクトース鎖認識領域のみを発現させ、試験管内での糖認識機構の解析、さらには糖認識部位の構造解析につなげたい。

Constant agglutination is shown in the origin and development of yeast mutants. The GPI-1 gene (gsf1^+) is also identified in the GPI-1 gene. In addition to the above, it is also necessary to conduct the following operations in order to improve the quality of the products. gsf1^+ gsf2 ^+ gsf1 ^+ gsf2 ^+ gsf1 ^+ gsf1^+ gsf2 ^+ gsf1^+ gsf1 ^+ gsf2 ^+ gsf1 ^+ gsf2 ^+ gsf1 ^+ gsf1 ^+ gsf2 ^+ gsf1 ^+ gsf1 ^+ gsf2 Gsf1-HA tag fusion protein production and indirect immunostaining method to confirm the results, cell membrane structure in the middle of the analysis Agglomeration is the result of the destruction of the original seed and the disappearance of agglutination. This agglutination property is shown in the dependency of the aggregation group, and the inhibition effect of various sugars (such as sugar, starch, and acid) is confirmed. The O-linked glycan modification of the O-linked domain is necessary for the maintenance of the O-linked activity of the O-linked domain. To confirm the possibility of existence of GSF1-N192 fusion in the N-terminal region of the GPI-192 membrane The results of the test showed that the agglutination activity was maintained in the 192-aminophenol field at the end of N. The binding and cell wall penetration in the cell wall of the cell line and the existence of the domain related to the maintenance of stability and aggregation are indicated. The method of genetic engineering is applied to the analysis of sugar recognition mechanism in the test tube and the structure analysis of sugar recognition part.

项目成果

Characterization of O-mannosyltransferase family in Schizosaccharomyces pombe.

• DOI: 10.1016/j.bbrc.2005.03.033
• 发表时间: 2005-05
• 期刊: Biochemical and biophysical research communications
• 影响因子: 3.1
• 作者: N. Tanaka;Yasuko Fujita;Shotaro Suzuki;M. Morishita;Y. Giga‐Hama;C. Shimoda;K. Takegawa

Mitochondrial ABC transporter Atm1p is required for protection against oxidative stress and vacuolar functions in Schizosaccharomyces pombe

粟酒裂殖酵母中，线粒体 ABC 转运蛋白 Atm1p 是防止氧化应激和液泡功能所必需的

• 发表时间: 2005
• 期刊: Bioscience, Biotechnology, and Biochemistry 69
• 作者: Tetsuhiro Nemoto;Takayoshi Matsumoto;Takamasa Masuda;Tsukasa Hitomi;Keiichiro Hatano;Yasumasa Hamada;Naotaka Tanaka;Tomoko Iwaki
• 通讯作者: Tomoko Iwaki