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Mechanism of new regeneration activating factor of aged nervous tissue secreted from hepatocytes and its determination with vitro immunization

肝细胞分泌新的衰老神经组织再生激活因子的机制及其体外免疫测定

基本信息

批准号：
04836020
负责人：
HORIE Hidenori
金额：
$ 1.22万
依托单位：
Yokohama City University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1992
资助国家：
日本
起止时间：
1992 至 1993
项目状态：
已结题

项目摘要

コラーゲンゲル培養法を導入することにより成熟・老化マウス及びラットから末梢中枢神経組織を摘出し培養することに成功した。中枢神経組織として網膜を、末梢神経組織としては脊髄後根神経節を用い神経再生を促進する肝細胞分泌因子の活性、作用機序、因子の同定について検討した。成熟ラットの視神経を予め切断し、7日間飼育後眼球を摘出し網膜を細断してコラーゲンゲル内で培養した。培養24時間後より網膜片から突起が再生してきた。これらの突起は神経に特異的な抗体である抗neurofilament抗体、網膜神経節細胞に対して特異的な抗Thy-1.2抗体に陽性で網膜神経節細胞からの再生神経突起であることが明かとなった。この培養網膜片に,成熟ラットをコラゲナーゼ灌流して分離し、精製後肝実質細胞をWilliam's Eを基本培地とする無血清液で培養しその培養上清(HCM)を作用させた。培養3日目ではHCMにより再生神経突起数は2.6培に達した。HCMには中枢神経の神経再生を促進する因子が含まれていることが判明した。この因子は膜による分画で5k<<100kに存在し、95℃・5分の熱処理で変性するタンパク質であることが明かとなった。一方成熟・老化した動物の末梢神経系においても同一の分画の因子が、神経線維をともなった脊髄後根神経節の神経線維切断端からの神経細再生を促進することが明確となった。用いた培養系は生体中ときわめて近い器官培養なので、肝細胞から分泌されている因子が成熟・老化した動物の生体内で中枢・末梢神経系の神経再生・生存維持効果を発揮することが出来ると期待される。現在まで神経再生促進作用があると考えられている20種類の物質を検討したがこの因子と同様な作用を発現する因子はなく、新たな物質である可能性が高い。現在この因子の分離精製を行っており、単一のタンパク質として単離し、そのアミノ酸配列が決定出来るのも間近である。

The culture method is successful. The central nervous system and peripheral nervous system are used to promote the regeneration of liver cells. The activity, action mechanism and factor identification of liver cells are discussed. The mature retina was cut off, and after 7 days of incubation, the eyeball was extracted, and the retina was cut off. After 24 hours of incubation, the membrane was regenerated. Anti-neurofilament antibody, anti-Thy-1.2 antibody, anti-neurofilament antibody, anti-Thy-1.2 antibody, anti-Thy-1.2 Cultured omental slices, mature cells, perfused cells, isolated and purified liver cells, William's E, cultured in serum-free medium, and cultured in supernatant (HCM). After 3 days of culture, the number of regenerated neurons reached 2.6. HCM is the central nervous system regeneration promotion factor. This factor is 5k<<100k for film separation, and 95℃·5 min for heat treatment. A mature and aging animal's peripheral nervous system is divided into the same factors, and the same factors. In vitro culture system, factors secreted by hepatocytes in vivo maturation, aging and development of neuroregeneration, survival maintenance effects in central and peripheral nervous systems of animals are expected. Now, there are 20 kinds of substances that can promote the regeneration of the brain, and the factors that can promote the regeneration of the brain are very high. Now the separation and purification of these factors are carried out in a simple way, and the quality of the products is determined in a simple way.