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A.lipoferumの窒素固定活性制御遺伝子の解析と窒素固定能の改良

脂苋固氮活性调控基因分析及固氮能力改良

基本信息

批准号：
05660085
负责人：
日高真誠
金额：
$ 1.34万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1993
资助国家：
日本
起止时间：
1993 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-05660085/
关键词：
窒素固定制御遺伝子 Azospirillum lipoferum nifA遺伝子 draT遺伝子 draG遺伝子

项目摘要

まず、Azospirillum lipoferum FSのnifA遺伝子の上流にEscherichia coli lacプロモーターを結合した改変遺伝子とともに、A.brasilenseのnifHプロモーターとE.coli lacZ遺伝子を結合したレポーター遺伝子をE.coli MV1190に導入した。この形質転換体はIPTG存在下でNifAタンパクを発現する。これがnifHプロモーターからの転写を促進すればβ-ガラクトシダーゼが発現されるので、この酵素活性を指標にNifAの転写促進因子としての機能を解析した。好気条件で培養した場合はβ-ガラクトシダーゼ活性の発現を認めることができなかったが、微好気あるいは嫌気条件では明瞭な発現が認められた。この事は、A.lipoferumのNifAタンパク自身が酸素センサーとして機能し、酸素存在下ではNifAタンパクの転写促進機能が不活性化することでnif遺伝子群の発現を抑制しているという可能性を示唆する。次に、A.lipoferum FSのdraTG遺伝子をpTTQ18のtacプロモーターの下流に挿入し窒素固定菌Klebsiella oxytoca NG13に導入したところ、この形質転換体は培地中のアンモニアの存在に迅速に反応した窒素固定活性の制御系であるammonia switch off/on現象を示すようになった。これにより、DraT,DraGタンパクはニトロゲナーゼの酵素活性を制御していることが示された。一方、A.lipoferum FSのnifAならびにdraTG遺伝子を改変する作業は、この菌の形質転換能の低さから成果を得ることができなかった。エレクトロポレーションによる遺伝子導入は現在のところ成功していない。そこで大腸菌との接合による遺伝子導入の可能性を検討した。E.coli S17-1中のpSUP10141が接合伝達され、さらにそのプラスミド上のTn5が染色体に転移することで獲得するカナマイシン抵抗性を指標に遺伝子導入効率を測定したところ、10^<-7>の頻度が達成された。

In the upper stream of the E.coli lacZ, Azospirillum lipoferum FS, nifA, and nifA subsets, you will need to combine the changes to the E.coli lacZ subsets, which will change the data from the E.coli MV1190 to enter the data. In the presence of the IPTG, there is an error in the NifA. This is not true because of the fact that there is a significant difference in the expression of nifH. The enzyme activity refers to the writing enhancer of the NifA gene. Good conditions, better conditions, better conditions. In the presence of acid, it is possible to inactivate the nif subgroup to inhibit the possibility of inhibition of NifA response in the presence of acid. In the second stage, there was a rapid reaction to the asphyxiant immobilization activity in the culture ground of the asphyxiant immobilized bacteria Klebsiella oxytoca NG13, the asphyxiant immobilized bacteria Klebsiella oxytoca NG13, the asphyxiant immobilization activity, the asphyxiant fixation activity, the asphyxiant fixation activity, the asphyxiant immobilization activity, the asphyxiant fixation activity, the asphyxiant immobilization activity, the asphyxiant immobilization activity, the asphyxiant fixation activity, the asphyxiant fixation activity, the asphyxiant immobilization activity In order to control the activity of enzyme, the enzyme activity was determined by the method of DraT,DraG. On the one hand, the A.lipoferum FS nifA has improved the operation of the draTG, and the bacteria have been shown to be able to improve the results. Please tell me that you are successful in the current situation. Enter the possibility that the fungus can be conjugated. In E.coli S17-1, the pSUP10141 conjugates show that the Tn5 chromosomes have been transferred, the chromosomes have been transferred, the resistance has been detected, the penetration rate has been measured, and the temperature of 10 ^ & lt;-7> has been measured.