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サイクリックヌクレチオドの瞬時的増加による心筋イオン電流増大の定量的解析

环核苷酸瞬时增加引起的心肌离子电流增加的定量分析

基本信息

批准号：
05670045
负责人：
尾野恭一
金额：
$ 1.22万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1993
资助国家：
日本
起止时间：
1993 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

モルモットの心室筋細胞を単離し、cGMPのイオン電流に及ぼす効果について、パッチクランプ法により解析した。cGMPは、電極内灌流及びcaged化合物をパッチ電極内に詰める事により直接細胞内に投与した。心筋には、カテコラミン刺激で活性化されるC1電流が存在する。caged-cGMPを細胞内に投与し、低濃度カテコラミン刺激下に紫外光を照射したところ、C1電流振幅がさらに増大した。しかし、cGMP単独ではこの電流を活性化しなかった。次に、caged-cAMPを細胞内に投与し、紫外光照射によりcAMPを瞬時的に遊離した時の、C1電流の活性化を観察した。電流の活性化には数秒を要し、最大反応後徐々に不活化した。cAMP代謝阻害剤存在下では反応が持続する事から、電流の不活化は、遊離したcAMPが内因性の加水分酵素によって分解される事によると考えられた。数muMのcGMPを細胞内に投与しておくと、cAMPに対する反応がコントロールのそれと比較して有意に遅延した。以上の事から、哺乳類においてはcGMPは、cAMPの分解を抑制する事によりbeta受容体刺激を促進していると結論し、European Journal of Physiologyに発表した。さらに、cAMPによるC1電流活性化の反応速度について解析した。電流活性化はS字状の時間経過を示し、その後半部分は時定数1-2秒の指数関数でほぼ近似できた。この時間経過はcAMPの濃度に依存し、またフォスファターゼ阻害剤によって修飾されることから、チャネル蛋白の燐酸化過程を反映すると考えられた。この結果は現在投稿中である。

The analysis of ventricular muscle cell isolation, cGMP, current and effect cGMP, intra-electrode perfusion and caged compounds are administered directly into cells. C1 current is activated by cardiac muscle stimulation. caged-cGMP was injected into the cells and the amplitude of C1 current increased under the stimulation of ultraviolet light at low concentrations. The current is activated by cGMP. In addition, caged-cAMP was injected into the cell, and the activation of C1 current was observed when cAMP was instantaneously dissociated by ultraviolet light. Current activation is required for a few seconds, and maximum response is required for deactivation. In the presence of cAMP metabolic inhibitors, the reaction time, current inactivation time, free cAMP and endogenous water addition enzyme time are examined. The number of cGMP in the cell is higher than that of cAMP. These findings were reported in the European Journal of Physiology. C1 current activation and reaction velocity are analyzed in detail. The current activation time of the S shape is indicated, and the second half of the S shape is indicated by the exponential time of 1-2 seconds. The time course depends on the concentration of cAMP, and the phosphorylation of cAMP is reflected in the protein. The result is now posted in.