川崎病疾患に於ける血管炎発生機序と好中球機能亢進

川崎病血管炎和中性粒细胞过度活跃的机制

• 批准号: 05670716
• 负责人: 綱脇 祥子
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: National Research Institute for Child Health and Development
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 1994
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-05670716/
• 关键词: 活性酸素; NADPH oxidase; Affinity label; 慢性肉芽腫症; サイトゾル因子

好中球活性酸素生成系、すなわち、NADPH oxidase systemの構成因子として、細胞膜に存在するcytochrome b558のalphaおよびbetaサブユニット、Krev 1、さらに、サイトゾルに存在する、p47、p67およびrac p21の関与が報告されている。通常、このsystemは不活性型であり、細胞を刺激すると、これらサイトゾル因子が細胞膜へ移行して活性化され、NADPHから電子を受け取り、O^-_2を生成する。しかし、この集合した電子伝達系の入口であるNADPH結合タンパク質に関しては、まだ決着がついていない。さらに、p47、p67の機能も殆ど解明されていない。NADPH結合部位に関して、サイトゾル側に存在するとするサイトゾル説が唱えられてきが、我々は、この説を否定した。最近、逆に、細胞膜に存在する分子量91Kのb558、betaサブユニット(gp91)が分子内にNADPHおよびFAD両結合部位を持つとするフラボシトクロム説が唱えられている。しかし、アミノ酸配列から推定されたものであり直接の証明はなされていない。そこで、我々は、NADPHアナログ、[^<32>P]2′,3′-dialdehyde NADPH(oNADPH)を合成し、膜画分をアフィニティーラベルしたところ91kではなく84kの位置に強いNADPH結合バンドを得た。この84Kタンパク質はgp91欠損型慢性肉芽腫症(CGD)患者から得た膜画分にも存在していた。以上の結果は、b558はNADPH結合タンパク質ではなく、細胞膜には、b558以外にも酸化還元因子が存在することを示している。次に、p47、p67の機能を探るため、サイトゾルをGTPアナログ、[^<32>P]oGTPでアフィニティーラベルした後、これらサイトゾル因子に対する特異抗体で免疫沈降を行なった。抗p47抗体と異なり、抗p67抗体は、新奇p40タンパク質を免疫沈降させた。さらに、p40タンパク質は、各種カラムワークに於てp67と挙動が一致した。次に、CGD患者のサイトゾルを用いて同様の実験を行なったところ、p47欠損型では、正常と同じくp40は検出されたが、p67欠損型では確認されなかった。p40はサイトゾル中のプロテアーゼによるp67の分解産物ではなくp67と1:1に結合しており、freeな状態では存在していなかった。

The relationship between the production system, NADPH oxidase system, alpha and beta of cytochrome b558, Krev 1, Krev 2, Krev 3, Krev 4, Krev 5, Krev 6, Krev 7, Krev 8, Krev 1, Krev 7, Krev 1, Krev 2, Krev 1, Krev 1, Krev 3, Krev 1, Krev 2, Krev 1, Krev 1, Krev 3, Krev 1, Krev 2, Krev 1, Krev 3, Krev 1, Krev 1, Krev 3, Krev 1, Krev 1, Generally, the system is inactive, cell stimulation, cell membrane migration, NADPH electron uptake, and O^-2 generation. The entrance to the electron transfer system is connected to the NADPH and the mass is connected to the electron transfer system. The functions of p47, p67 and p47 are almost solved. The NADPH binding site is related to the existence of the protein, and the protein is negative. Recently, in reverse, cell membrane exists molecular weight 91K b558, beta protein (gp91), NADPH and FAD binding sites in the molecule. It's a direct proof of the existence of a compound. 2 <32>′,3′-dialdehyde NADPH(oNADPH) was synthesized in the presence of NADPH at 91k and NADPH at 84k. The 84K protein and gp91 protein of chronic granulomatosis (CGD) patients were found to be related to the membrane. These results indicate the presence of NADPH binding factors in cell membranes other than b558. The function of p47 and p67 was explored, and the GTP was detected.[^<32>P]oGTP was detected by specific antibody and immune sedimentation. Anti-p47 antibody, anti-p67 antibody, novel p40 antibody, anti-p67 antibody, anti-p47 antibody, anti-p67 antibody, anti-p47 antibody, anti-p47 antibody, anti-p67 antibody, anti-p47 antibody, anti-p67 antibody, anti-p47 antibody, anti-p67 antibody, anti-p47 antibody, anti-p47 antibody, anti-p67 antibody, anti-p47 antibody, anti-p67 antibody, anti-p47 antibody, anti-p67 antibody, anti-p47 antibody The p40 version of this article is consistent with the p67 version. CGD patients are treated with the same treatment, p47 deficient type, p40 normal type, p67 deficient type. p67:1, p40: 1, p67: 1, p67: 1, p67:

项目成果

Takahashi,N.et al.: "FcgammaI and FcgammaIII on polymorphonuclear leukocyte in cord blood" Arch.Dis.Child. (in press). (1994)

Takahashi,N.et al.：“FcgammaI 和 FcgammaIII 对脐带血中多形核白细胞的影响”Arch.Dis.Child。

Tsunawaki,S.et al.: "NADPH-binding component of the respiratory burst oxidase system" J.Exp.Med.179. 291-297 (1994)

Tsunawaki,S.et al.：“呼吸爆发氧化酶系统的 NADPH 结合成分”J.Exp.Med.179。

Mizunari,H.et al.: "Activation of respiratory burst oxidase is accompanied by desensitization of p47^<phox>in nucleoside-triphosphate binding……" Biochem.Biophys.Res.Commun.198. 191-199 (1994)

Mizunari, H. 等人：“呼吸爆发氧化酶的激活伴随着核苷三磷酸结合中 p47^phox 的脱敏……”Biochem.Biophys.Res.Commun.191-199 (1994)。

Tsunawaki,S.et al.: "A novel cytosolic component,p40 of respiratroy burst oxidase associates with p67 and is absent in patients with chronic……" Biochem.Biophys.Res.Commun.(in press). (1994)

Tsunawaki, S. 等人：“一种新的胞质成分，呼吸爆发氧化酶的 p40 与 p67 相关，并且在慢性……患者中不存在”Biochem.Biophys.Res.Commun.（出版中）。

Ohyashiki,K.et al.: "Myelodysplastic syndrome evolving into a myeloproliferative disorder:one disease or two?" Leukemia. 7. 338-340 (1993)

Ohyashiki,K.等人：“骨髓增生异常综合征演变成骨髓增生性疾病：一种还是两种疾病？”