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川崎病疾患に於ける好中球活性酸素生成異常症の解析

川崎病中性粒细胞活性氧产生障碍分析

基本信息

批准号：
04670630
负责人：
綱脇祥子
金额：
$ 1.28万
依托单位：
National Research Institute for Child Health and Development
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1992
资助国家：
日本
起止时间：
1992 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-04670630/
关键词：
活性酸素 NADPH oxidase Affinity label 慢性肉芽腫症細胞質因子

项目摘要

常に活性酸素を放出することは、生体に対して毒性があり、通常、活性酸素生成系(NADPH oxidase system)は、不活性型である。細胞刺激後、細胞質因子が細胞膜へ移行して活性化され、NADPHから電子を受取り0^-_2を生成すると考えられている。しかし、集合した電子伝達系の入口であるNADPH結合タンパク質は、精製されていない。好中球をPMA刺激すると、細胞質因子は細胞膜へ移行し、10分後、かなりの細胞質因子(p47-phox、p67-phox)が膜結合型となった。NADPHアナログ[^<32>P]2',3'+dialdegyde NADPH(oNADPH)を合成し、高い活性酸素生成能を持つ活性化膜をアフィニティーラベルしたところ、84kDaの位置にバンドが認められた。過去において、膜ではなく細胞質側にNADPH結合部位が存在すると考えられてきた。しかし、47kDa、67kDaの位置にバンドは認められなかった。最近、cytochrome b_<I58>のβ-subunit(91kDa)が同一分子にFADとNADPH結合部位を持つとするflavocytochrome説が提唱されている。しかし、91kDaの位置にバンドは認められなかった。分子量84kDaは、91kDaと近似しており、β-subunitへの結合である可能性がある。そこで、β-subunit欠損型の慢性肉芽腫症患者好中球を用いてアフィニティーラベルを行ったところ、検討した19例中全ての患者において正常好中球とほぼ同じ結合活性を示した。更に、p47-phox、p67-phoxは、強いGTP、ATP結合活性を持っていた。以上の結果から、細胞質因子は、NADPH oxidaseの活性化を制御するnucleoside triphosphate結合タンパク質であり、電子伝達系の入口であるNADPH結合タンパク質は、細胞膜上に存在する84kDaタンパク質である可能性が示唆された。

Active acid release is usually associated with biological toxicity, NADPH oxidase system, or inactive form. After cell stimulation, cytoplasmic factors are transferred to the cell membrane, activated, NADPH and electrons are extracted from the cell membrane, and then produced. The entrance to the electron transfer system is NADPH, which is combined with the quality of the electron transfer system. After 10 minutes of PMA stimulation, cytoplasmic factors (p47-phox, p67-phox) and membrane-bound cytokinins (p47-phox, p67-phox) were transferred to the cell membrane. NADPH (oNADPH<32>) 2',3'+dialdegyde NADPH(oNADPH) synthesis, high activity of acid production energy to maintain the activation of the membrane, 84kDa position, can be identified. In the past, NADPH binding sites existed on the cytoplasmic side of the membrane. At the positions of 47 kDa and 67 kDa, there is no difference between the two. Recently, the <I58>β-subunit(91kDa) of cytochrome b_(2) has been identified as the FAD and NADPH binding site of the same molecule. 91kDa position. Molecular weight 84kDa, 91kDa approximate, β-subunit binding possibility. In all 19 cases of chronic granuloma patients with β-subunit deficiency, the binding activity of β-subunit was detected. P47-phox, p67-phox, strong GTP, ATP binding activity are maintained. The above results indicate the possibility that NADPH triphosphate binds to cytosolic factors and NADPH oxidase activation, and that NADPH triphosphate binds to cytosolic factors and NADPH oxidase at the entrance to electron transfer systems, and that NADPH triphosphate binds to cytosolic factors and NADPH oxidase at the membrane.